[发明专利]葡聚糖的制备

说明书

发明背景

本申请要求2006年6月15日提交的美国序列号60/813,971、题 为葡聚糖的制备的权益。

本发明涉及包含β-葡聚糖的组合物。更具体地说，本发明涉及可 溶性β-葡聚糖组合物及其在干细胞动员中的用途。

葡聚糖往往被描述为葡萄糖的聚合物，并衍生自酵母、细菌、真 菌和植物，例如燕麦或大麦。已知含β(1-3)-连接的吡喃葡萄糖主链的 葡聚糖具有生物学活性，尤其是，已经表明它们调节免疫系统，更近 期地，介导造血干细胞和祖细胞(HSPC)的动员。

各种癌症的治疗日益涉及减少细胞数的治疗，包括高剂量化疗或 放射疗法。这些治疗使患者的白细胞数下降，抑制骨髓造血活性，并 增加他们感染和/或出血的风险。因此，接受减少细胞数的治疗的患者 也必须接受治疗，以重新恢复骨髓功能(造血作用)。

尽管在干细胞动员和技术方面取得进展，高达20-25％的患者表现 出不良的动员，并不能进行自体移植。PGGβ-葡聚糖是可溶性酵母衍 生的多糖，先前已经表现出介导造血干细胞和祖细胞(HSPC)的动员。

发明概述

在本发明中，酵母被培养、收获和纯化，生成基本不含污染有挥 发性有机化合物(VOCs)的微粒β-葡聚糖。通过使酵母细胞或其片段经 受去除宿主细胞杂质的一系列的碱、表面活性剂和酸提取，制备微粒 β-葡聚糖。

经以上工艺或经现有工艺方法生产的微粒β-葡聚糖在升高的温度 和压力下可溶解于酸性溶液。然后，澄清和先后采用疏水相互作用的 层析(HIC)、凝胶渗透层析(GPC)纯化所生成的可溶性β-葡聚糖。作为 药剂，以较高剂量给予可溶性β-葡聚糖，而无增加的或实际上减少的 可观察到的副作用或不利结果。

图的简述

图1是生产微粒β-葡聚糖的方法的示意图。

图2是生产可溶性β-葡聚糖的方法的示意图。

发明详述

微粒β-葡聚糖

图1是从酵母生产不溶的或微粒β-葡聚糖的方法10的概况，它 包括步骤12-22。在步骤12中，酵母培养基典型地在摇瓶或发酵桶中 生长。用于本发明的酵母株可为任何株，其实例包括酿酒酵母 (Saccharomyces(S.)cerevisiae)、德尔布酵母(S.delbrueckii)、罗斯酵母 (S.rosei)、小椭圆酵母(S.microellipsodes)、卡尔酵母(S.carlsbergensis)、 二孢酵母(S.bisporus)、发酵性酵母(S.fermentati)、鲁酵母(S.rouxii)、 粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、乳酸克鲁维酵母 (Kluyveromyces(K.)lactis)、脆壁克鲁维酵母(K.fragilis)、多孢克鲁维 酵母(K.polysporus)、白假丝酵母(Candida(C.)albicans)、阴道假丝酵 母(C.cloacae)、热带假丝酵母(C.tropicalis)、产朊假丝酵母(C.utilis)、 温奇汉逊酵母(Hansenula(H.)wingei)、arni汉逊酵母(H.arni)、亨利汉 逊酵母(H.henricii、美国汉逊酵母(H.americana)、加拿大汉逊酵母(H. canadiensis)、碎囊汉逊酵母(H.capsulata)、多形汉逊酵母(H. polymorpha)、克鲁弗毕赤酵母(Pichia(P.)kluyveri)、巴斯德毕赤酵母 (P.pastoris)、多形毕赤酵母(P.polymorpha)、罗丹毕赤酵母(P. rhodanesis)、奥默毕赤酵母(P.ohmeri)、牛球拟酵母(Torulopsis(T.) bovina)和光滑球拟酵母(T.glabrata)。

在批量生产的一个实施方案中，从酵母培养开始，经摇动烧瓶培 养基逐步扩大到250-L规模的生产发酵桶。酵母在富含维生素，例如 叶酸、肌醇、烟酸、泛酸(钙和钠盐)、吡哆醇HCl和胸腺嘧啶HCl和 来自化合物例如氯化铁六水合物；氯化锌；氯化钙二水合物；钼酸； 硫酸铜五水合物和硼酸的微量金属的葡萄糖-硫酸铵培养基中生长。在 约0.02％浓度时，也可加入消泡剂，例如防沫剂(Antifoam)204。