[发明专利]编码N‑甲基腐胺氧化酶之核酸及其应用

权利要求书

1.一种分离的核酸分子，其选自以下的核苷酸序列：

a)SEQ ID NO：1表示的核苷酸序列；

b)SEQ ID NO：2表示的核苷酸序列；

c)编码SEQ ID NO：3表示的氨基酸序列的核苷酸序列。

2.一种生产N-甲基腐胺氧化酶的方法，其包括：

a)使用包含权利要求1所述分离的核酸分子的核酸构建体遗传改造细胞和；

b)在可以产生N-甲基腐胺氧化酶的条件下培养所述细胞。

3.一种重组N-甲基腐胺氧化酶，其氨基酸序列为SEQ ID NO：3。

4.一种遗传工程宿主细胞，其包含权利要求1所述的核酸序列，其中所述的细胞是在体外培养的并且所述的细胞不具备发育成完整植株的能力。

5.根据权利要求4所述的宿主细胞，其中所述细胞选自细菌、酵母、丝状真菌、藻类、植物细胞和哺乳动物细胞。

6.如权利要求5所述的宿主细胞，其中，所述细胞为植物细胞。

7.一种相对于对照植物在植物中下调N-甲基腐胺氧化酶的表达的方法，包括：

a)在所述植物中引入核酸，所述核酸包括：

(i)RNAi质粒或病毒诱导的基因沉默载体中的至少一种；以及

(ii)选自以下的核苷酸序列：

(1)SEQ ID NO：1中的核苷酸754-1132；

(2)SEQ ID NO：1中的核苷酸1521-1772；

(3)SEQ ID NO：1中的核苷酸1129-1405；

(4)SEQ ID NO：1；和

(5)SEQ ID NO：2；和

b)在与相似条件下培养的对照植物相比，所述核苷酸序列被转录的条件下培养所述植物，所述转录导致所述植物中N-甲基腐胺氧化酶水平的降低。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述植物属于菸草属。

9.根据权利要求7所述的方法，其中所述植物是菸草。

10.根据权利要求7所述的方法，其包括下调NBB1、A622、喹啉磷酸核糖转移酶和腐胺甲基转换酶中的至少一种。

11.一种分离的宿主植物细胞，通过遗传工程化具有降低的N-甲基腐胺氧化酶水平，包括：

a)RNAi质粒，所述RNAi质粒包括下列至少一种序列：

(i)SEQ ID NO：1中的核苷酸754-1132；

(ii)SEQ ID NO：1中的核苷酸1521-1772；

(iii)SEQ ID NO：1中的核苷酸1129-1405；

(iv)SEQ ID NO：1；或

(v)SEQ ID NO：2；或

b)病毒诱导的基因沉默载体，所述病毒诱导的基因沉默载体包括下列至少一种序列：

(i)SEQ ID NO：1中的核苷酸754-1132；

(ii)SEQ ID NO：1中的核苷酸1521-1772；

(iii)SEQ ID NO：1中的核苷酸1129-1405；

(iv)SEQ ID NO：1；或

(v)SEQ ID NO：2；或

其中所述序列(i)-(v)位于正义或反义或反向重复序列方向上，其中所述的细胞是在体外培养的并且所述的细胞不具备发育成完整植株的能力。

12.根据权利要求11所述分离的细胞，其中所述细胞是茄科或古柯科植物细胞。

13.根据权利要求11所述分离的细胞，其中所述细胞是烟草属，曼陀罗属，颠茄属，澳茄属，天仙子属，茄参属，木曼陀罗属，赛莨菪属或红木属植物细胞。

14.根据权利要求11所述分离的细胞，其中所述细胞是菸草属植物细胞。

15.根据权利要求11所述分离的细胞，其中所述细胞是菸草植物细胞。