[发明专利]人或人源化免疫球蛋白在非人转基因动物中增强的表达

说明书

发明领域

本发明涉及通过促进正常B细胞发育和通过维持携带有人(或人源化)免疫球蛋白基因座的非人动物中人(或人源化)抗体的表达而 

改善非人转基因动物中人(或人源化)免疫球蛋白的表达的方法。特别地，本发明涉及同时表达编码人(或人源化)Igα和/或Igβ(B细胞受体的组分)的转基因以及编码人(或人源化)免疫球蛋白基因座的转基因。本方法允许人(或人源化)抗体例如在转基因非人动物的血液、乳液或卵中的显著表达。 

相关技术的说明 

抗体是已经成功用于治疗多种人类疾病和病症(例如癌症、过敏性疾病)、预防移植排斥和宿主抗移植物疾病的一类重要的药学产品。 

获得自非人动物的抗体制剂的主要问题在于非人免疫球蛋白在人类患者中的固有免疫原性。为了降低非人抗体的免疫原性，已表明可以通过将动物可变区(V)外显子与人类恒定区(C)外显子融合而获得嵌合抗体基因。该嵌合或人源化的抗体具有对人类最小的免疫原性并且适合用于人类受试者的治疗性治疗。 

已经研发了人源化单克隆抗体并且将其用于临床应用。然而，总体上，无论是嵌合、人源化还是人单克隆抗体在治疗诸如癌症或烈性病原体感染等破坏性疾病上的应用由于这些疾病的复杂性、多因子病因学和适应性而受到限制。针对于单一限定靶标的单克隆抗体通常在这些靶标改变、进化和突变时失效。例如，恶性肿瘤可获得对标准单克隆抗体治疗的抗性。这一问题的解决方案是使用具有靶向多个进化靶标能力的多克隆抗体。多克 隆抗体可以中和细菌或病毒毒素，并引导免疫应答以杀死和消除病原体。 

因此，对于大规模生产高效价、高亲和性、人源化多克隆和单克隆抗体的适合方法存在巨大的临床需求。此外，由于从抗体产量的角度讲偏爱在如兔、鸡、绵羊和牛等较大型转基因动物中生产抗体，因此也高度需要表达较大量转基因编码的产物的较大型建立者动物的产生。 

人源化单克隆抗体通常是这样的人类抗体，其中一些CDR残基，以及可能一些FR残基由来自非人动物(如啮齿类)的抗体的同功位点残基所取代。基本上可以按照Winter及其同事的方法(Jones等人，Nature，321：522(1986)；Riechmann等人，Nature，332：323(1988)；Verhoeyen等人，Science，239：1534(1988))，通过用非人动物(例如啮齿类)CDR或CDR序列取代人类单克隆抗体的相应序列而进行人源化。 

在动物中制造人源化抗体时遇到的一个问题是宿主抗体的内源性生产高于转基因抗体，而需要抑制该内源性抗体的生产。已经描述了抗体(嵌合和种系突变鼠中的重链连接区(JH)基因)的纯合缺失，导致内源性抗体生产的完全抑制。将人种系免疫球蛋白基因阵列转移到该种系突变鼠中将导致在抗原攻击时人抗体的生产。参见例如，Jakobovits等人，Proc.Natl.Acad.Sci USA，90：2551(1993)；Jakobovits等人，Nature，362：255(1993)；Bruggemann等人，Year in Immunol.，7：33(1993)；2006年6月20日授权的美国专利No.7,064,244；其公开内容在此通过整体引用作为参考。