[发明专利]使用亲和色谱法纯化蛋白质的精氨酸洗涤液

说明书

相关申请案

本申请案根据35 U.S.C.§119(e)主张2006年9月8日申请的美国专利申请案第60/843,084号的优先权，所述申请案以全文引用的方式并入本文中。

技术领域

本申请案涉及蛋白质纯化。具体来说，本申请案涉及纯化与介质结合的蛋白质的方法，所述方法是利用：使至少一种含有精氨酸或精氨酸衍生物的洗涤液通过所述介质，且收集经纯化的蛋白质。

背景技术

随着重组蛋白技术的出现，所关注蛋白质可使用工程改造成表达所述蛋白质的经培养的真核或原核宿主细胞系来产生。所需重组蛋白于医药应用的用途通常取决于能够可靠地从杂质(诸如宿主细胞蛋白、蛋白质变异体和来自培养基的化合物)中回收足够含量的蛋白质。

常规蛋白质纯化方法被设计成是基于尺寸、电荷、溶解度和疏水性程度的差异来从杂质中分离所关注蛋白质。所述方法包括色谱法，诸如亲和色谱法、离子交换色谱法、尺寸排阻色谱法、疏水性相互作用色谱法、固定金属亲和色谱法和羟基磷灰石色谱法。这些方法常常利用可设计成选择性粘附所关注蛋白质或杂质的分离介质。在结合-洗脱模式(bind-elute mode)中，所需蛋白质与分离介质选择性结合且通过不同溶剂从介质分别洗脱。在导流模式(flow-through mode)中，杂质与分离介质特异性结合，而所关注蛋白质并不结合，由此可回收“导流”中的所需蛋白质。

当前纯化蛋白质(诸如抗体)的方法包括两个或两个以上色谱步骤。举例来说，所述蛋白质纯化方案中的第一步可包括利用所关注蛋白质与固定捕获剂之间的特异性相互作用的亲和色谱法步骤。蛋白A吸附剂尤其适用于蛋白质(诸如含有Fc区的抗体)的亲和捕获。然而，使用蛋白A色谱法进行蛋白质纯化存在诸多缺点。在一些情况下，蛋白A捕获剂的渗漏导致经洗脱的蛋白质产物受污染，而在其它情况下，亲和捕获并不从所关注蛋白质中分离蛋白质变异体(诸如蛋白质的聚集形式)。另外，在中和pH值后，蛋白A洗脱汇集物中会形成不同程度的混浊度和/或沉淀。这一混浊度和/或沉淀会导致经中和的蛋白A洗脱汇集物中产物大量损失。因此，需要减少产物损失且提高洗脱汇集物中的产物纯度的纯化方法。

发明内容

本发明部分涉及从含有产物(诸如抗体)和一或多种杂质的负载流体中分离产物的方法，所述方法是利用：使所述负载流体通过结合所述产物的介质，接着使至少一种含有精氨酸或精氨酸衍生物的洗涤液通过所述介质，且使用洗脱液收集所述产物。

一方面，提供一种分离产物的方法。所述方法包含提供包含产物和一或多种杂质的负载流体和使所述负载流体与可在适合于结合所述产物的条件下结合产物的介质接触，由此获得经结合的介质。所述方法进一步包含使所述经结合的介质与一或多种包含精氨酸或精氨酸衍生物的洗涤液接触，由此获得经洗涤的介质。所述方法进一步包含在适合于洗脱产物的条件下使所述经洗涤的介质与洗脱液接触。接着可收集包含产物的洗脱物。也可将产物进一步纯化和/或调配以供治疗使用。

在此方面的一些实施例中，产物是蛋白质，例如治疗性蛋白。在某些实施例中，产物是抗体。在特定实施例中，所述抗体是针对以下一种或针对以下一种而产生：生长和分化因子-8(Growth and Differentiation Factor-8，GDF-8)、白细胞介素-13(IL-13)、白细胞介素-22(IL-22)、A-β、晚期糖基化终产物受体(Receptor for Advanced Glycation Endproduct，RAGE)和5T4。在一些实施例中，产物是抗原结合片段。在一些实施例中，产物是融合蛋白。在特定实施例中，产物是Ig-融合蛋白。在某些实施例中，产物是Fc-蛋白、免疫结合物、细胞因子、白细胞介素、激素或治疗性酶。

在此方面的一些实施例中，所述介质是基质、树脂或色谱柱。在特定实施例中，介质是蛋白A色谱柱，例如重组蛋白A柱，或蛋白G色谱柱，例如重组蛋白G柱。