[发明专利]微量mRNA的扩增方法及其应用

权利要求书

1.一种微量mRNA的扩增方法，其特征在于包括：

向包含微量mRNA的溶液添加虚拟RNA制作混合溶液的第一工序，所 述虚拟RNA的序列是由序列号6所表示的、而且被生物素化的碱基序列；

使用混合溶液中的微量mRNA及虚拟RNA这两者作为模板，且通过利 用对所述微量mRNA和所述虚拟RNA进行退火的引物的逆转印反应，合成 所述微量mRNA和所述虚拟RNA的反义DNA的第二工序；

对合成后的反义DNA合成互补的正义DNA，形成由正义DNA和反义 DNA组成的双链DNA的第三工序；

在所形成的双链DNA的正义DNA的5’末端侧连接RNA聚合酶的启 动子序列制作扩增用双链DNA的第四工序；以及

通过RNA聚合酶，由扩增用双链DNA扩增RNA的第五工序。

2.如权利要求1所述的微量mRNA的扩增方法，其特征在于：所述第 四工序包含在由第三工序中形成的双链DNA的两末端侧连接启动子序列， 再只切断连接在双链DNA的正义DNA的3’末端侧的启动子序列的第六工 序。

3.如权利要求2所述的微量mRNA的扩增方法，其特征在于：所述第 四工序中在双链DNA的正义DNA的3’末端侧形成限制酵素位点，以在由 第三工序中形成的双链DNA的两末端连接了启动子序列时，能够只切断连 接在双链DNA的正义DNA的3’末端侧的启动子序列。

4.如权利要求2或3所述的微量mRNA的扩增方法，其特征在于：所 述第四工序包含除去切断的启动子序列及虚拟RNA的第七工序。

5.如权利要求1～4中任一项所述的微量mRNA的扩增方法，其特征 在于：所述虚拟RNA的序列包含聚腺苷酸序列。

6.如权利要求1～5中任一项所述的微量mRNA的扩增方法，其特征 在于：所述RNA聚合酶是T7聚合酶、T3聚合酶或SP6聚合酶。

7.如权利要求1～6中任一项所述的微量mRNA的扩增方法，其特征 在于：所述混合溶液中的所述虚拟RNA的浓度为0.5～10μg/μL。

8.一种cDNA文库的制作方法，其特征在于：该制作方法的一个工序 包含权利要求1～7中任一项所述的微量mRNA的扩增方法。

9.一种探针的制作方法，其特征在于：该制作方法的一个工序包含权 利要求1～7中任一项所述的微量mRNA的扩增方法。