[发明专利]蛋白酶活化受体-1(PAR1)的拮抗剂

说明书

与相关申请交叉参考

本申请要求于2006年7月18日提交的美国临时申请No.60/831,800 和2007年7月17日提交的美国申请No.11/778,924的权益，其全部公开 内容引入本文作为参考用于所有的目的。

发明领域

本发明涉及蛋白酶活化受体-1(PAR1)的抗体和抗原结合分子拮抗剂。

发明背景

蛋白酶活化受体1(PAR1)是属于G蛋白偶联受体(GCPR)类别的凝血 酶受体。PAR1在多种组织例如内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞、神 经元和人血小板中表达。其涉及与止血、增殖和组织损伤相关的细胞应答。 通过PAR1经凝血酶介导的对血小板聚集的刺激是血管中血块形成和伤口 愈合中重要的步骤。凝血酶以如下方式活化PAR1：蛋白水解去除PAR1 的细胞外N-端结构域的一部分并暴露新的PAR1N-端。然后，新PAR1N- 端的头几个氨基酸(SFLLRN；SEQ ID NO：37)作为束缚配体(tethered ligand)起作用，所述束缚配体与受体的另一部分结合，通过结合的G-蛋白 起始信号转导。也可以通过血块形成中涉及的其他丝氨酸蛋白酶活化 PAR1。

对PAR1-介导的信号转导活性的调节具有若干种治疗性应用。PAR1 的抑制有助于治疗血栓形成和血管增生病症和抑制癌症的发展。见例如 Darmoul，等，Mol Cancer Res(2004)2(9)：514-22和Salah，et al，Mol Cancer Res(2007)5(3)：229-40。PAR1抑制剂(包括拮抗剂抗体或抗原结合分子) 可用于治疗由PAR1细胞内信号转导介导的大量疾病状况。例如，PAR1 抑制剂(包括拮抗剂抗体或抗原结合分子)可用于预防或抑制慢性肠道炎 性病症，包括炎性肠病(IBD)、肠易激综合征(IBS)和溃疡性结肠炎；和纤 维变性病症，包括肝纤维化和肺纤维化。见例如Vergnolle，等，J Clin Invest (2004)114(10)：1444；Yoshida，et al，Aliment Pharmacol Ther(2006) 24(Suppl 4)：249；Mercer，等，Ann NY Acad Sci(2007)1096：86-88；Sokolova and Reiser，Pharmacol Ther(2007)PMID：17532472。PAR1抑制剂(包括 拮抗剂抗体或抗原结合分子)还可用于预防或抑制缺血-再灌注损伤，包括 心肌、肾、脑和肠的缺血-再灌注损伤。参阅例如Strande，等，Basic Res. Cardiol(2007)102(4)：350-8；Sevastos，等，Blood(2007)109(2)：577-583； Junge，等，Proc Natl Acad Sci U S A.(2003)100(22)：13019-24和Tsuboi，等， Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol(2007)292(2)：G678-83。抑制PAR1 细胞内信号转导也可用于抑制细胞的单纯疱疹病毒(HSV1和HSV2)感 染。见Sutherland，等，J Thromb Haemost(2007)5(5)：1055-61。

发明概述

本发明一方面提供抗人蛋白酶活化受体-1(hPAR1)的单克隆拮抗剂抗 体或抗原结合分子。该抗体或抗原结合分子以和第二抗体相同的结合特异 性结合人PAR1。所述第二抗体具有(i)SEQ ID NO：5的重链可变区序列和 SEQ ID NO：6的轻链可变区序列，或(ii)SEQ ID NO：7的重链可变区序列 和SEQ ID NO：8的轻链可变区序列。

在一些实施方案中，抗体与下述hPAR1表位特异结合，所述表位包 含氨基酸序列SFLLRNPNDKYEPFWEDEEKNESGLTE(SEQ ID NO：38)或其片段，例如至少8、9、10、11、12、13、14或15个连续氨基 酸的片段。在一些实施方案中，抗体不与来自其他物种的PAR1(例如小 鼠PAR1(mPAR1))或除PAR1以外的其它PAR亚型如蛋白酶活化受体 -2(PAR2)发生显著结合(即交叉反应)。