[发明专利]用于检测样品中活微生物细胞的分析方法

权利要求书

1.一种用于检测样品中活微生物细胞的分析方法，所述分析方法 包括如下步骤：

i)将含有具有细胞内ATP的活微生物细胞与含有细胞外ATP的 外来材料的样品分离；

ii)将ATP降解酶加入到所述样品中，以充分降解所述样品中的 细胞外ATP；

iii)将含磷酸盐的化合物加入到所述样品中，以基本上中断所述 ATP降解酶的作用；并且

iv)让所述样品接受检测分析以确定样品中未降解的ATP水平， 以提供对样品中活微生物细胞水平的指示；其中的含磷酸盐的化合物 选自焦磷酸钠、三磷酸五钠或多磷酸钠中的一种或多种。

2.根据权利要求1所述的分析方法，其中在分析未降解的ATP 水平之前将提取剂加入所述样品中，以从所述样品提取未降解的ATP。

3.根据权利要求1所述的分析方法，其中所述ATP降解酶是胞外 ATP酶。

4.根据权利要求3所述的分析方法，其中所述胞外ATP酶是腺苷 三磷酸双磷酸酶。

5.根据权利要求4所述的分析方法，其中所述腺苷三磷酸双磷酸 酶试剂被缓冲成pH值在9至5的范围内。

6.根据权利要求5所述的分析方法，其中所述腺苷三磷酸双磷酸 酶的浓度是0.005单位/ml至最多10单位/ml样品溶液。

7.根据权利要求1所述的分析方法，其在室温下进行并且反应时 间在1-30分钟之间。

8.根据权利要求1所述的分析方法，其中将二价阳离子与所述 ATP降解酶一起加入。

9.根据权利要求8所述的分析方法，其中所述二价阳离子是钙离 子和/或镁离子。

10.根据权利要求2所述的分析方法，其中所述提取剂是用于从 活细胞提取ATP的表面活性剂。

11.根据权利要求10所述的分析方法，其中所述表面活性剂包括 季铵化合物、二烷基铵盐和二双胍中的一种或多种。

12.根据权利要求2所述的分析方法，其中所述提取剂选自N-N-二 甲基十二烷-1-胺、chloroprozamine、液体溶胞产物和二氯化镓（III）^β- 二酮合衍生物中的一种或多种。

13.根据权利要求2所述的分析方法，其中所述提取剂的使用浓 度为0.05-50g/l。

14.根据权利要求13所述的分析方法，其中让所述提取剂反应 3-10分钟之间的时段。

15.根据权利要求1所述的分析方法，其中将中和剂加入到含有 所述提取剂的样品中。

16.根据权利要求1所述的分析方法，其中将第二种试剂加入到 所述样品中，所述第二种试剂能够通过如下手段提高所述样品中的 ATP水平：通过操纵细胞代谢来增加细胞内ATP水平，或通过增强荧 光素酶和荧光素检测ATP的活性。