[发明专利]检测核酸的系统和方法

权利要求书

1.检测样品中靶核酸的方法，所述方法包括：

通过将所述样品加热至第一温度，使所述样品解链，其中所述样品包含：

与所述靶核酸的至少一部分杂交的引物；

包含第一和第二区域的杂交探针，其中所述第一区域与所述靶核酸的至少一部分杂交，且所述第二区域不与所述靶核酸杂交，且其中所述第二区域包含可检测标记；和

聚合酶和具有核酸外切酶活性的酶，其中所述聚合酶在杂交的探针的方向上延伸杂交的引物，且所述酶的核酸外切酶活性切割所述杂交的探针，由此释放包含所述探针第二区域和所述可检测标记的探针片段；和

其中所述第一温度高于所述引物和存在于所述样品中的双链核酸的T_m；

随后，通过将温度降低至低于所述第一温度的第二温度，使所述样品退火，以便使所述引物和所述杂交探针与所述样品中的靶核酸的单链部分各自杂交；和

随后通过使所述聚合酶在第三温度下延伸与所述靶核酸杂交的引物，延长所述引物；

使所述酶的核酸外切酶活性切割所述杂交探针，由此释放所述探针片段；

任选地重复解链、退火和延长至少一次；

将所述样品与固相支持体的表面接触，其中所述固相支持体的表面包含一个或多个与所述探针片段的第二区域的至少一部分杂交的捕获探针；

使所述捕获探针在第四温度下与存在于所述样品中的所探针片段的至少一部分杂交，其中所述第四温度低于所述第二和第三温度；以及

检测所述固相支持体表面上的标记；

其中所述杂交探针的至少一部分与所述杂交探针的另一部分杂交，由此形成折叠结构，且其中所述折叠结构的解链温度(T_m)低于所述第三温度且高于所述第四温度。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合酶和所述具有核酸外切酶活性的酶是同一分子。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述折叠结构的解链温度(T_m)是41℃至66℃。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述折叠结构的解链温度(T_m)是58℃至63℃。

5.如权利要求1所述的方法，其中在相应折叠结构中，所述捕获探针基本上接触不到所述探针片段中与所述捕获探针杂交的的第二区域。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述第三温度高于或等于所述第二温度且小于所述第一温度。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述第二温度和所述第三温度相同。

8.如权利要求1所述的方法，其中所述杂交探针还包含邻近所述第一区域且与所述第二区域相对的第三区域，其中所述第三区域不与所述靶核酸杂交。

9.如权利要求8所述的方法，其中将所述杂交探针的第二区域和第三区域都与所述杂交探针的另一部分杂交以形成所述的折叠结构。

10.如权利要求8所述的方法，其中所述第三区域的至少一部分与所述第二区域的至少一部分杂交以形成所述的折叠结构。

11.如权利要求5所述的方法，其中将所述杂交探针的第二区域的至少一部分与所述杂交探针的另一部分杂交以形成所述的折叠结构。

12.如权利要求1所述的方法，其中所述聚合酶是热稳定酶。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述热稳定酶是Taq聚合酶。

14.如权利要求1所述的方法，其中所述固相支持体的表面包含电极，且其中所述可检测标记是可以将电子转运到所述电极或者从所述电极转运电子的部分。

15.如权利要求14所述的方法，其中所述可检测标记是二茂铁部分。

16.如权利要求14所述的方法，其中所述固相支持体的表面包含金。

17.如权利要求1所述的方法，其中所述固相支持体包含多个形成流体槽的交叉板，其中所述板的至少某些表面包含捕获探针，且其中将所述样品与固相支持体的表面接触包括使所述样品流经所述流体槽。

18.如权利要求17所述的方法，其中所述板的表面包含电极。

19.如权利要求18所述的方法，其中所述交叉板的表面包含捕获探针。