[发明专利]快速转化单子叶植物的方法

权利要求书

1.一种产生转基因单子叶植物的方法，所述方法包括：

a)用至少第一选定DNA转化外植体；

b)将外植体在包含有效比例的细胞分裂素和植物生长素的第一 培养基中进行培养，以促进能够形成根和/或枝条的可再生结构的发 育，其中第一培养基中细胞分裂素与植物生长素的比例为0.005至 0.03w/w，并且所述第一培养基起共培养和延迟培养基的作用，其中 第一培养基包含0.001mg/L至10mg/L的细胞分裂素和0.5mg至10 mg/L的植物生长素；和

c)将外植体在能支持根和枝条组织的同时生长的至少第二和/或 第三培养基中进行培养，以产生出再生的转基因单子叶植株，其中第 二培养基含有其量与在第一培养基中的量相比降低的植物生长素，并 且第二和/或第三培养基包含高于第一培养基的量的蔗糖；

其中所述单子叶植物是玉米植物，其中再生的被转化单子叶植 株在转化外植体的4-8周之内产生。

2.权利要求1的方法，所述方法还包括将再生的转基因单子叶 植株转移到植物生长培养基。

3.权利要求2的方法，其中所述生长培养基是非无菌基质。

4.权利要求3的方法，其中所述非无菌基质包含在穴盘中。

5.权利要求1的方法，其中所述可再生的结构在转化外植体的 6-14天内形成。

6.权利要求1的方法，其中步骤b)在转化外植体的6-14天内 完成。

7.权利要求1的方法，其中进行步骤a)和b)，但不使愈伤组织 增殖超过10天至两周。

8.权利要求1的方法，其中第一培养基包含杀细菌化合物。

9.权利要求1的方法，其中第二和/或第三培养基包含减少愈 伤的增殖和更快地再生的有效量的蔗糖，其浓度高于第一培养基中的 浓度。

10.权利要求1的方法，其中第一培养基是Lynx1947，其组成 为：

。

11.权利要求1的方法，其中步骤(c)包括将外植体在能支持根和 枝条组织同时生长的无添加的植物生长调节剂的液体培养基中进行 培养，以产生出再生的转基因单子叶植株。

12.权利要求11的方法，其中所述能支持根和枝条组织同时生 长的培养基是Lynx2067，其组成如下：

。

13.权利要求1的方法，其中步骤(b)进行6天至12天的时间。

14.一种产生转基因单子叶植物的方法，所述方法包括：

a)用至少第一选定DNA转化外植体；

b)将外植体在包含有效比例的细胞分裂素和植物生长素的第一 培养基中进行培养，以促进能够形成根和/或枝条的可再生结构的发 育，其中第一培养基中细胞分裂素与植物生长素的比例为0.005至 0.03w/w，其中第一培养基包含0.001mg/L至10mg/L的细胞分裂素 和0.5mg至10mg/L的植物生长素；和

c)将外植体在能支持根和枝条组织的同时生长的至少第二和/或 第三培养基中进行培养，以产生出再生的转基因单子叶植株，其中第 二培养基含有其量与在第一培养基中的量相比降低的植物生长素，并 且第二和/或第三培养基包含高于第一培养基的量的蔗糖；

其中所述单子叶植物是玉米植物，其中(c)在转化外植体的4-8 周内开始。

15.权利要求1的方法，其中所述细胞分裂素选自BAP、玉米 素、激动素和TDZ；所述植物生长素选自IAA、2，4-D、NAA、IBA 和麦草畏。

16.权利要求1的方法，其中步骤(c)还包括将外植体在第二培养 基中进行培养，该第二培养基包含的细胞分裂素与植物生长素之间的 比例相对于第一培养基来说提高，以促进根和枝条的同时发育。