[发明专利]慢性淋巴细胞性白血病(CLL)中受miR-29和miR-181调控的TCL1的表达

说明书

相关申请的交叉参考

N/A

政府资助

本发明总体或部分由来自NIH授予/合同号P01 CA81534的基金 资助。政府具有本发明的某些权利。

发明背景

慢性淋巴细胞性白血病(B-CLL)是世界上最常见的人白血病，在 美国每年占有大约10,000个新病例。¹在成熟T细胞白血病中，发现 TCL1(T-细胞白血病/淋巴瘤1)癌基因为14q31.2上频繁染色体重排的 靶。²之前已报导在B细胞中表达TCL1的转基因小鼠发生B-CLL。³本 发明者现在本文中认为TCL1的失调在B-CLL的发病机理中可能是因果 事件，因为本发明者现也已显示TCL1是Akt癌蛋白(B细胞和T细胞 中抗细胞凋亡信号转导中的至关重要的分子)的辅激活因子。⁴

最近的报导显示，人CLL中高TCL1的表达与未突变的V_H状态和 ZAP70阳性相关，表明TCL1-驱动的CLL是B-CLL的侵袭性形式。⁵与 人B-CLL中的不良预后相关的最重要的遗传因子之一是染色体11q缺 失。⁶

MicroRNA是据认为参与时间和组织特异性基因调控的高保守非 编码基因的大家族。⁷我们最近证明microRNA表达谱可用于区分正常 B细胞和恶性B-CLL细胞，并且microRNA特征(signature)与慢性淋 巴细胞性白血病的预后和进展相关。^8，9

目前未获得普遍成功的治疗或预防B-CLL的方法。通常基于多种 预后参数(包括特定肿瘤标记的分析)来选择疗程。

尽管对B-CLL的治疗进行了相当多的研究，但仍然难以对CLL进 行有效的诊断和治疗，并且在患者中观察到的死亡率表明需要对疾病 的诊断、治疗和预防进行改进。

发明概述

本发明部分基于与正常对照细胞相比在乳腺癌细胞中差异表达 的miRNA的慢性淋巴细胞性白血病癌症特异性特征的鉴定。

因此，本发明包括诊断受试者是否患有慢性淋巴细胞性白血病 (B-CLL)或处于发展其的风险中的方法，该方法包括测量来自所述受试 者的受试样品中至少一种miR基因产物的水平，其中与对照样品中相 应的miR基因产物水平相比，受试样品中miR基因产物水平的改变表 示受试者患有B-CLL或处于发展B-CLL的风险中。

在某些实施方案中，至少一种miR基因产物是miR-29或miR-181。 在某些实施方案中，至少一种miR基因产物是miR-29b和/或 miR-181b。

可使用多种本领域技术人员熟知的技术测量至少一种miR基因产 物的水平。在一个实施方案中，使用Northern印迹分析测量至少一种 miR基因产物的水平。在另一个实施方案中，受试样品中至少一种miR 基因产物的水平低于对照样品中相应的miR基因产物的水平。此外， 在另一个实施方案中，受试样品中至少一种miR基因产物的水平可高 于对照样品中相应的miR基因产物的水平。

本发明还提供了诊断与受试者中一个或多个预后标记关联的 B-CLL的方法，该方法包括测量来自所述受试者的B-CLL样品中至少 一种miR基因产物的水平，其中与对照样品中相应的miR基因产物水 平相比，受试样品中至少一种miR基因产物水平的改变表示受试者患 有与一个或多个预后标记关联的B-CLL。在一个实施方案中，这样测 量至少一种miR基因产物的水平，即通过逆转录获自受试者的受试样 品的RNA以提供一组靶寡脱氧核苷酸；将所述靶寡脱氧核苷酸与包含 miRNA-特异性探针寡核苷酸的微阵列杂交以提供受试样品的杂交谱； 和，将受试样品杂交谱与从对照样品产生的杂交谱相比较来进行测量。 至少一种miRNA的信号的改变表示受试者患有B-CLL或处于发展 B-CLL的风险中。

本发明还包括治疗受试者的CLL的方法，其中与从对照样品产生 的信号相比，至少一种miRNA的信号失调(例如，下调，上调)。

在某些实施方案中，微阵列包含针对选自miR-29或miR-181和 其组合的一种或多种miRNA的miRNA-特异性探针寡核苷酸。