[发明专利]用于多肽的双标记以容许质谱分析中的多通道化的化合物和方法

权利要求书

1.用于多肽的质谱分析的一组标记试剂，每种标记试剂包含：

-异重标记物组件，

-蛋白质/肽反应基团，和

-包含报告基团(RP)和平衡基团(BG)的同量异序标记物组件。

2.根据权利要求1的一组标记试剂，其中所述异重标记物组件是 同位素标记物组件。

3.根据权利要求1的一组标记试剂，其中所述异重标记物组件被 包含在所述同量异序标记物的所述报告基团和/或所述平衡基团之内。

4.根据权利要求1的一组标记试剂，其中所述蛋白质/肽反应基 团与蛋白质或多肽中的半胱氨酸反应。

5.根据权利要求1的一组标记试剂，其中每种标记试剂进一步包 含亲和标签。

6.根据权利要求5的一组标记试剂，其中所述亲和标签是可裂解 的。

7.根据权利要求5的试剂，其中所述亲和标签是生物素。

8.一种用于同时分析不同的样品中包含官能团的一种或多种多 肽的存在的方法，其包括步骤：

a)标记步骤，其中每种样品被一组差异化双标记试剂中的一种标 记，所述标记是通过容许所述标记试剂与所述样品中一种或多种多肽 或从其产生的肽的官能团反应而进行的；

其中所述一组差异化双标记试剂具有相同的或基本上相同的化学 结构，并且包含异重和同量异序标记物组件，和其中每种标记试剂包 含异重和同量异序标记物组件的独特组合，

b)集中所述不同的样品来获得多肽样品混合物，

c)从所述多肽样品混合物中选择性地分离所述双标记的多肽或肽； 和

d)通过质谱法分析所述分离的标记的多肽或肽的相对出现。

9.根据权利要求8的方法，其中所述异重标记组件是同位素标记 组件。

10.根据权利要求8的方法，其中所述一组标记试剂的标记试剂包 含亲和标签。

11.根据权利要求8的方法，其进一步包括在步骤(a)之后将所述蛋 白质裂解成肽的步骤。

12.根据权利要求11的方法，其中所述裂解用胰蛋白酶进行。

13.根据权利要求8的方法，其中在步骤c)中，根据在所述标记的 多肽或肽上存在的亲和标签选择性地分离所述多肽或肽。

14.根据权利要求8的方法，其中所述官能团是硫醇。

15.根据权利要求8的方法，其中所述多肽或从其产生的肽的官能 团作为另一个官能团的修饰结果存在。

16.权利要求8的方法，其中步骤(c)包括通过电泳或层析从所述集 中的多肽中分离标记的多肽或肽级分的步骤。

17.权利要求8的方法，其中步骤(d)包括用MS测定步骤(c)中获 得的所述分离的标记的多肽或肽级分中不同质量的相对数量的步骤。

18.权利要求17的方法，其中步骤(d)进一步包括使所述分离的标 记的多肽级分经历碰撞诱导的解离(CID)并测定其中不同的同量异序标 记的多肽的相对数量的步骤。

19.权利要求18的方法，其中不同的同量异序标记的多肽的相对 数量通过测定CID之后从所述同量异序标记物释放的报告基团的相对 数量来测定。

20.权利要求19的方法，进一步包括测定所述多肽的序列的步骤。

21.一种用根据权利要求1的具有同量异序和异重标记物组件的 标记试剂标记多肽样品的方法，包括使所述标记试剂与所述样品中所 述多肽上的官能团反应的步骤。

22.根据权利要求8到21的任一项的方法用于鉴定蛋白质的用途， 所述蛋白质在对照蛋白质样品和一种或多种实验或疾病蛋白质样品之 间被差异化表达。