[发明专利]芳基硼酸在蛋白质标记中的应用

权利要求书

1.共价连接亲和标签至含组氨酸蛋白质的方法，该方法包括在铜催 化剂存在下将蛋白质与具有通式结构(I)的化合物接触的步骤：

其中A是亲和标签，B是硼和L是任选的连接体。

2.根据权利要求1的方法，其中所述化合物在芳环进一步被卤素、 烷氧基或烷基取代。

3.根据权利要求1的方法，其中亲和标签A为生物素。

4.根据权利要求1的方法，其中所述化合物相应于具有式(II)的分 子：

5.根据权利要求1的方法，其中所述化合物进一步包含标记物。

6.根据权利要求5的方法，其中所述标记物由一个或多个重原子同 位素组成。

7.根据权利要求1的方法，其中所述化合物相应于具有式(III)的分 子：

8.用于从蛋白质样品或合并的蛋白质样品的混合物中分离含组氨 酸肽的方法，包括步骤：

a)用断裂剂将蛋白质样品中完整的蛋白质断裂成肽，

b)在铜催化剂存在下将蛋白质样品与具有结构通式(I)的芳基硼标 签化试剂接触，

其中A是亲和标签，B是硼和L是任选的连接体，从而使芳基硼标签化 试剂与存在于肽中的组氨酸，如果存在的话，得以反应，

c)通过所述亲和标签使标签化的肽与亲和基质结合，和

d)从亲和基质上除去结合的标签化的肽以获得分离的含组氨酸肽。

9.根据权利要求8的方法，其中在步骤a)之前进行步骤b)，将芳 基硼标签化试剂与样品中未断裂的蛋白质接触，使存在于蛋白质中的组 氨酸，如果存在的话，标签化。

10.用于同时分析在不同样品中一种或多种含组氨酸的蛋白质的出 现的方法，其包括步骤：

a)任选地，用断裂剂将样品中的完整的蛋白质断裂成肽，

b)在铜催化剂存在下将每种样品与一组芳基硼酸标记试剂中的一 种接触，其中硼酸标记试剂具有结构通式(I)，

其中A是亲和标签，B是硼和L是任选的连接体，并且进一步包含标记 物，其是同位素或同量异序标记物，使得每种标记试剂的结构基本上相 同，

c)合并不同的样品以获得多肽或肽样品混合物，

d)通过所述亲和标签从多肽或肽样品混合物中选择性分离标记的 多肽或肽，和

e)通过质谱法分析分离的标记的多肽或肽的出现。

11.用于鉴定蛋白质样品中蛋白质的存在的方法，包括步骤：

a)在铜催化剂存在下通过将蛋白质与具有通式结构(I)的标签化试 剂接触，修饰蛋白质样品中的蛋白质的组氨酸：

其中A是亲和标签，B是硼和L是任选的连接体，

b)用断裂剂将蛋白质样品中的蛋白质断裂成肽，

c)通过所述亲和标签从所述肽中分离含组氨酸肽，

d)通过一个或多个肽纯化步骤纯化分离的含组氨酸肽，从而获得纯 化的含组氨酸肽，

e)测定或计算纯化的含组氨酸肽除质量之外的至少一种物理化学 性质，

f)在MS上测定分离和纯化的含组氨酸肽的质量，和

g)对于每种分离和纯化的含组氨酸肽，将所述质量和所述至少一种 其他物理化学性质与包含通过所述断裂剂产生的所有含组氨酸肽的质 量和一种或多种物理化学性质的数据库进行比较，从而鉴定纯化的含组 氨酸肽的相应亲本蛋白质，由此鉴定蛋白质样品中亲本蛋白质的存在。

12.权利要求11的方法，其中步骤(g)包括对于每种分离和纯化的 含组氨酸肽，鉴定质量相应于该分离和纯化的含组氨酸肽的质量的数据 库中的一种或多种含组氨酸肽，以及当对于一种分离和纯化的含组氨酸 肽鉴定出多于一种的肽时，将该分离和纯化的含组氨酸肽的至少一种其 他物理化学参数和数据库中被鉴定的多于一种的肽的那些进行比较。