[发明专利]饱和分析方法

说明书

发明领域

本发明涉及用于在样品中检测被分析物的改进的分析方法。具体 来说，本发明涉及分析装置，含有用于执行这样的分析的工具的试剂 盒以及，在被分析物与被分析物类似物之间对被分析物结合试剂上的 结合位点的结合竞争性的基础上，用于在样品中检测被分析物的分析 方法。

发明背景

结合分析是用于在样品中检测和定量被分析物的已被确立的技 术。它们对于在生物学样品中检测和/或测量物质，以作为疾病诊断和 预后的辅助工具、以及用于预测患者对疗法的反应，是特别有用的。 它们通常采取各种不同格样(format)的免疫分析的形式，其中被分析 物结合试剂是抗体或其功能片段。

大部分这样的分析方法是基于双位点的或“三明治”格样，它对 于能够同时结合两种或两种以上抗体或受体的被分析物是非常有用 的，但是不适合用于半抗原(半抗原由于其大小，通常在一个时候只 能结合一个抗原)。对于半抗原分析来说，通常需要使用典型情况下 用于抗原-抗体分析的饱和类型的分析方法。在这些分析方法中，样品 被分析物与固定量的试剂被分析物(或被分析物类似物，它已经被化 学修饰，使得它是例如可检测的或固定化的)竞争被分析物结合试剂 (例如抗体)上有限数量的结合位点。在饱和分析方法中，被分析物 和被分析物类似物的总数量大于被分析物结合试剂上结合位点的总数 量。

这些分析方法可以是直接竞争格样(其中样品被分析物、类似物 和被分析物结合试剂同时进行反应)，也可以是间接竞争格样(其中 允许样品被分析物和被分析物结合试剂首先在一起相互作用，然后再 与被分析物类似物反应)。后一种格样也被称为顺序分析法或返滴定 分析法。竞争分析一般使用带有可检测的信号基团的被分析物类似物 和未标记的抗体(通常连接到固相上)。密切相关的1-位点免疫测定 格样通常使用用可检测基团标记的抗体和固定化在固相上的被分析物 类似物。

因此，与被分析物结合试剂结合的被分析物类似物的量将与样品 中被分析物的量成反比，通过检测结合的被分析物类似物的量(对于 竞争分析来说)或结合的被分析物结合试剂的量(对于1-位点免疫测 量分析来说)，可以确定样品中被分析物的存在和/或量。检测信号的 降低比来自与阴性背景的检测信号的增加更困难，通常会导致损失灵 敏性，特别是如果检测是通过目测的话。测量游离的或未结合的信号 克服了这个问题，但是通常情况下游离的级份存在于较大体积中并且 是扩散的，这又会导致损失灵敏性。

对于靠近患者进行的分析方法存在着不断增长的需求，这主要是 为了缩短提供结果所需的时间。这样的分析方法被称为床旁分析 (Point-of-Care assays)，一般要求执行起来简单耐用，因为它们是在 非实验室的背景下，通常由非专业人员来进行的。理想情况下，它们 应该是完全自足的，不需要辅助的设备(读数装置可能例外)。如果 要有任何临床用途，床旁分析必需与基于实验室的分析方法具有相似 的灵敏度。但是，常规的免疫分析方法通常包含了复杂的方案和检测 系统，意味着它们通常不适合于床旁类型的应用。

已经开发了特定的床旁分析方法。最常用的是侧向流分析。通常， 这些方法是基于标记的流动成分(例如有色颗粒标记的抗体)、固定 化的成分(例如抗体条或点)以及膜，通过毛细作用使样品通过膜移 动。在存在被分析物的情况下，在固定化的抗体捕获区形成了“三明 治”，导致发展出有色的线或点。常规的侧向流分析方法示例在例如 美国专利5,656,503中(联合利华专利控股B.V)。这些分析方法规定 了固定化的抗体捕获区，尽管它在侧向流格样中与Geigel等(1982，Clin Chem 28：1894)中教导的径向格样不同。

对基本的侧向流格样进行了修改，以便能够进行竞争类型的分析。 这样修改过的侧向流分析方法可以基于标记的流动成分(例如有色颗 粒标记的抗体)、固定化的成分(例如条或点形式的被分析物类似物) 以及膜，通过毛细作用使样品通过膜移动。在不存在被分析物的情况 下，抗体标记的颗粒将与固定化的被分析物类似物结合，导致显出有 色的线或点，在存在被分析物的情况下，抗体上的结合位点将被占据， 使得颗粒标记的抗体的结合被减少或完全破坏，同时伴随着颜色减少 或完全消失。这样的分析方法由例如Biosite(US 5,143,852)教导。但 是，如上所述，检测颜色的减少可能是有问题的。