[发明专利]源自假单胞菌6-19的PHA合酶的突变体和使用该突变体制备乳酸酯均聚物或共聚物的方法

权利要求书

1、一种聚羟基链烷酸酯合酶突变体，其使用乳酰辅酶A作为底物生产乳酸酯聚合物或者乳酸酯共聚物并且具有SEQ.ID No：10的氨基酸序列，其中，在SEQ.ID No：10的氨基酸序列的第481位的谷氨酰胺发生突变。

2、如权利要求1所述的聚羟基链烷酸酯合酶突变体，其中，选自在第130位的谷氨酸、在第325位的丝氨酸和在第477位的丝氨酸中的至少一个氨基酸进一步发生突变。

3、如权利要求2所述的聚羟基链烷酸酯合酶突变体，其中，所述氨基酸序列具有如下任何一种突变：

a)S325T和Q481M；

b)E130D和Q481K；

c)S325T和Q481K；

d)E130D和Q481M；

e)E130D和Q481R；

f)E130D、S325T和Q481M；

g)E130D、S325T和Q481K；

h)E130D、S477R和Q481K；

i)E130D、S477R和Q481M；

j)E130D、S477R和Q481R；

k)E130D、S477H和Q481K；

l)E130D、S477H和Q481M；

m)E130D、S477H和Q481R；

n)E130D、S477F和Q481K；

o)E130D、S477F和Q481M；

p)E130D、S477F和Q481R；

q)E130D、S477Y和Q481K；

r)E130D、S477Y和Q481M；

s)E130D、S477Y和Q481R；

t)E130D、S325T、S477R和Q481M；

u)E130D、S325T、S477R和Q481K；

v)E130D、S325T、S477F和Q481M；

w)E130D、S325T、S477G和Q481M；或

x)E130D、S325T、S477F和Q481K。

4、一种编码权利要求1所述的聚羟基链烷酸酯合酶突变体的基因。

5、一种重组载体，其含有用于合成乳酸酯聚合物或共聚物的权利要求4所述的基因。

6、如权利要求5所述的重组载体，其进一步包含编码丙酰辅酶A转移酶(pct)的基因。

7、一种用权利要求5所述的重组载体转化的细胞或者植物。

8、一种使用权利要求6所述的重组载体转化而获得的细胞或者植物，其中，原始细胞或者植物没有编码丙酰辅酶A转移酶的基因。

9、一种制备乳酸酯聚合物或乳酸酯共聚物的方法，其中，该方法包括培养权利要求7或8所述的细胞或者植物。

10、如权利要求9所述的方法，其中，所述培养是在含有羟基链烷酸酯的培养基中进行的，并且所述共聚物为含有羟基链烷酸酯单体单元和乳酸酯单体单元的共聚物。

11、如权利要求10所述的方法，其中，所述羟基链烷酸酯是选自下列化合物中的至少一种：3-羟基丁酸酯、3-羟基戊酸酯、4-羟基丁酸酯、中链长(C_6～14)的(D)-3-羟基羧酸、3-羟基丙酸、3-羟基己酸、3-羟基庚酸、3-羟基辛酸、3-羟基壬酸、3-羟基癸酸、3-羟基十一烷酸、3-羟基十二烷酸、3-羟基十四烷酸、3-羟基十六烷酸、4-羟基戊酸、4-羟基己酸、4-羟基庚酸、4-羟基辛酸、4-羟基癸酸、5-羟基戊酸、5-羟基己酸、6-羟基十二烷酸、3-羟基-4-戊烯酸、3-羟基-4-反-己烯酸、3-羟基-4-顺-己烯酸、3-羟基-5-己烯酸、3-羟基-6-反-辛烯酸、3-羟基-6-顺-辛烯酸、3-羟基-7-辛烯酸、3-羟基-8-壬烯酸、3-羟基-9-癸烯酸、3-羟基-5-顺-十二碳烯酸、3-羟基-6-顺-十二碳烯酸、3-羟基-5-顺-十四碳烯酸、3-羟基-7-顺-十四碳烯酸、3-羟基-5，8-顺-顺-十四碳烯酸、3-羟基-4-甲基戊酸、3-羟基-4-甲基己酸、3-羟基-5-甲基己酸、3-羟基-6-甲基庚酸、3-羟基-4-甲基辛酸、3-羟基-5-甲基辛酸、3-羟基-6-甲基辛酸、3-羟基-7-甲基辛酸、3-羟基-6-甲基壬酸、3-羟基-7-甲基壬酸、3-羟基-8-甲基壬酸、3-羟基-7-甲基癸酸、3-羟基-9-甲基癸酸、3-羟基-7-甲基-6-辛烯酸、苹果酸、3-羟基琥珀酸甲酯、3-羟基己二酸甲酯、3-羟基辛二酸甲酯、3-羟基壬二酸甲酯、3-羟基癸二酸甲酯、3-羟基辛二酸乙酯、3-羟基癸二酸乙酯、3-羟基庚二酸丙酯、3-羟基癸二酸苄酯、3-羟基-8-乙酰氧基辛酸、3-羟基-9-乙酰氧基壬酸、苯氧基-3-羟基丁酸、苯氧基-3-羟基戊酸、苯氧基-3-羟基庚酸、苯氧基-3-羟基辛酸、对氰基苯氧基-3-羟基丁酸、对氰基苯氧基-3-羟基戊酸、对氰基苯氧基-3-羟基己酸、对硝基苯氧基-3-羟基己酸、3-羟基-5-苯基戊酸、3-羟基-5-环己基丁酸、3，12-二羟基十二烷酸、3，8-二羟基-5-顺-十四碳烯酸、3-羟基-4，5-环氧癸酸、3-羟基-6，7-环氧十二烷酸、3-羟基-8，9-环氧-5，6-顺-十四烷酸、7-氰基-3-羟基庚酸、9-氰基-3-羟基壬酸、3-羟基-7-氟庚酸、3-羟基-9-氟壬酸、3-羟基-6-氯己酸、3-羟基-8-氯辛酸、3-羟基-6-溴己酸、3-羟基-8-溴辛酸、3-羟基-11-溴十一烷酸、3-羟基-2-丁烯酸、6-羟基-3-十二碳烯酸、3-羟基-2-甲基丁酸、3-羟基-2-甲基戊酸和3-羟基-2，6-二甲基-5-庚烯酸。