[发明专利]用于鉴定软骨细胞表型稳定性以及筛选软骨形成影响因子的标记基因

权利要求书

1.一种确定细胞群在体内生成稳定透明软骨的能力的体外方法，该方法包 括确定所述群体表达一组至少三个标志物基因的水平，所述标志物基因包括 FRZB、ALK1以及选自下组的一个或多个标志物基因：PEDF、COL11、COL2、 FGFR3、OPN、BMP-2和RASF-PLA。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细胞群与化合物或条件接 触。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

-使细胞群与化合物或条件接触，以及

-确定所述细胞群表达一组至少三个标志物基因的水平，其中这一组标志 物基因包括FRZB、ALK1以及选自下组的一个或多个标志物基因：PEDF、 COL11、COL2、FGFR3、OPN、BMP-2和RASF-PLA。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

-在所述接触步骤前确定所述这组至少三个标志物基因在所述细胞群内的 表达水平，以及

-在所述接触步骤后，确定化合物或条件是否能够影响所述这组至少三个 标志物基因中的一个或多个的表达。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述至少三个标志 物的一组是至少4、5或6个标志物基因的一组，其中包含FRZB、ALK1以及 选自下组的2、3和4个标志物基因：PEDF、COL11、COL2和FGFR3。

6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，所述至少三个标志 物的一组是包括FRZB、ALK1、PEDF、COL11、COL2和FGFR3在内的至少 6个标志物基因的一组。

7.如权利要求3或4所述的方法，其特征在于，该方法还包括根据化合物 的存在对一组至少三个标志物基因的表达的影响来确定化合物对细胞群在体 内生成稳定透明软骨的能力的影响能力。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，能增强选自FRZB、COL11、 COL2、FGFR3、OPN、BMP-2或RASF-PLA中一个或多个正标志物基因的表 达的化合物被鉴定为对软骨形成有正面影响，能增强PEDF和/或ALK-1表达 水平的化合物被鉴定为对软骨形成有负面影响。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，化合物或条件影响软骨形成的 能力根据化合物或条件对选自FRZB、COL11、COL2、FGFR3、OPN、BMP-2 或RASF-PLA的一个或多个正标志物基因以及负标志物基因PEDF和/或 ALK-1的表达的累积效应而定。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞群获自关 节。

11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞群获自 健康供者。

12.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞群获自 患有骨软骨缺损的个体。

13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其特征在于，其中一组标志物 中标志物的表达水平利用定量方法确定。

14.一组标志物在鉴定能够影响细胞在体外生成软骨的能力的化合物中的 应用，其特征在于，这组标志物包含一组至少三个标志物基因，其中包括FRZB、 ALK1以及选自PEDF、COL11、COL2、FGFR3、OPN、BMP-2或RASF-PLA 的一个或多个标志物。

15.如权利要求14所述的应用，其特征在于，所述标志物组包含至少6个 标志物，其中包括FRZB、ALK1、PEDF、COL11、COL2和FGFR3。

16.一种试剂盒，该试剂盒包含用于检测一组基因在软骨形成细胞内的表达 的探针，所述这组基因包括一组至少三个标志物基因，其中包括FRZB、ALK1 以及选自PEDF、COL11、COL2、FGFR3、OPN、BMP-2或RASF-PLA的一 个或多个标志物。