[发明专利]基于人类胚泡来源的干细胞和祖细胞的新型毒性分析方法

权利要求书

1.用于在人种中检测和/或预测毒性的基于人类胚泡来源的干细 胞的体外毒性分析方法，其中该分析方法能够对物质的毒性进行新型 检测，和/或与非人类分析方法或基于成体人类细胞类型的分析方法相 比更有效地检测毒性。

2.用于在人种中检测和/或预测毒性的基于从人类胚泡来源的干 细胞衍生的人类祖细胞的体外毒性分析方法，其中该分析方法能够对 物质的毒性进行新型检测，和/或与非人类分析方法或基于成体人类细 胞类型的分析方法相比更有效地检测毒性。

3.体外毒性分析方法，包括

(i)将人类胚泡来源的干细胞接种到一个或多个多孔板的一个或 多个孔中

(ii)将成熟的人类细胞类型接种到(i)中多孔板的不同的孔中或接 种到一个或多个不同板的一个或多个孔中

(iii)任选地，将一个或多个从人类胚泡来源的干细胞衍生的祖细 胞群分别接种到(i)和/或(ii)中的多孔板的不同的孔中，或接种到一个或 多个不同的多孔板的一个或多个孔中，

条件是接种的密度使得细胞基本上维持其增殖能力，直到对暴露 于细胞的一种或多种物质的一种或多种效应进行测量的时间点。

4.体外毒性分析方法，包括

(i)将从人类胚泡来源的干细胞衍生的一个或多个祖细胞群分别 接种到一个或多个多孔板中

(ii)将成熟的人类细胞类型接种到(i)中多孔板的不同的孔中或接 种到一个或多个不同的板中

条件是接种的密度使得细胞基本上维持其增殖能力，直到对暴露 于细胞的一种或多种物质的一种或多种效应进行测量的时间点。

5.体外毒性分析方法，包括

(i)将人类胚泡来源的干细胞接种到一个或多个多孔板的一个或 多个孔中

(ii)将从人类胚泡来源的干细胞衍生的一个或多个祖细胞群分别 接种到(i)中的一个或多个多孔板中，或接种到一个或多个不同的板中

条件是接种的密度使得细胞基本上维持其增殖能力，直到对暴露 于细胞的一种或多种物质的一种或多种效应进行测量的时间点。

6.体外毒性分析方法，其特征为

(i)在多孔板中3,000-20,000个细胞/孔，更优选10,000-15,000个 细胞/孔的人类胚泡来源的干细胞，以及每个单独的孔100-500个细胞， 更优选每个单独的孔大约250个细胞的从胚泡来源的干细胞衍生的人 类祖细胞

(ii)将细胞暴露于一种或多种浓度的一种或多种物质

(iii)从细胞毒性和/或胚胎毒性终点来分析效应。

7.权利要求2-6的体外毒性分析方法，基于从胚泡来源的干细胞 衍生的人类祖细胞，诸如中胚层，内胚层或外胚层细胞类型，例如成 纤维细胞，心肌细胞类祖细胞，肝和胰祖细胞，以及神经祖细胞。

8.权利要求2-7的体外毒性分析方法，其中毒性是人类分化毒性 (在发育中的人类细胞上测量的)，诸如人类胚胎毒性。

9.用于在人种中检测和/或预测毒性的，包含选自人类胚泡来源的 干细胞，人类祖细胞和人类成体类细胞中的至少两种人类细胞类型， 诸如至少三种，诸如至少四种，诸如至少五种人类细胞类型的体外毒 性分析方法，其中该分析方法能够对物质的毒性进行新型检测，和/或 与非人类分析方法或基于成体人类细胞类型的分析方法相比，更有效 地检测毒性。

10.权利要求3-9的体外毒性分析方法，其中人类祖细胞是 hBS-MPs。

11.前述权利要求任一项的体外毒性分析方法，其中在1539，384， 96，48，24，12或6孔板中所用细胞的数量范围为每孔1到1,000,000 个细胞，优选为1,000-100,000个细胞，优选为10,000-30,000个细胞， 更优选为10,000-20,000个细胞。