[发明专利]用于控制细胞培养物生长的方法

权利要求书

1.一种在补料分批培养技术中控制微生物生长至高细胞密度的方法，包 括：

在培养容器中提供两相培养系统，该系统包括：

-a)固体或凝胶相，和

-b)液体培养基，其中

液体培养基初始不包括或包括少于最佳量的葡萄糖用作用于微生物期 望生长的限制生长基质，和固体或凝胶相包括琼脂作为凝胶形成物质和淀 粉作为聚合物基质，其并不为微生物直接消化和能被酶促消化形成限制生 长的基质；

在所述的两相培养系统中培养微生物；

以可控的方式用葡糖淀粉酶作为酶处理聚合物基质以消化聚合物基质 和控制限制生长的基质在液体培养基中的释放，其中微生物利用限制生长的 基质用于生长，和

控制聚合物基质的消化和限制生长基质的释放以获得所期望的释放率 和控制微生物的生长。

2.权利要求1的方法，其特征在于聚合物基质通过在固体或凝胶相中被 酶消化。

3.权利要求1的方法，其特征在于聚合物基质自固体或凝胶相分散到液 体培养基，和聚合物基质在液体培养基中被酶消化。

4.权利要求1的方法，其特征在于用酶处理聚合物基质包括添加所述酶 至液体培养基。

5.权利要求1的方法，其特征在于所述酶是由所述微生物生成的。

6.权利要求1的方法，其特征在于固体或凝胶相存在于培养容器底部的 层。

7.权利要求1的方法，其特征在于固体或凝胶相包括在上面的琼脂基 质。

8.权利要求1的方法，其特征在于培养系统进一步包含覆盖在固体或凝 胶相之上的第二层凝胶，和第二层控制聚合物基质自固体或凝胶相至液体培 养基的扩散。

9.权利要求1-8中的方法，其特征在于所述固体或凝胶相处于珠子形式 和悬于液体培养基中。

10.权利要求1的方法，其特征在于所述培养容器是生物反应器，发酵 器，摇瓶，或微量滴定板。