[发明专利]改良的重组人类精氨酸I表达系统

说明书

技术领域

本发明涉及人类精氨酸酶I的克隆。特别地，本发明涉及对应于所述人类精氨酸酶I的核酸分子和质粒。本发明还涉及一种用以表达所述人类精氨酸酶I的重组蛋白的大肠杆菌。本发明还涉及一种生产重组蛋白的方法。

背景技术

重组工序是利用基因工程生物去生产有医药用途的蛋白。好些例子如胰岛素，生长激素和疫苗就是重组工序的产品。上述的蛋白可以在工厂里大量地以大桶的基因工程细菌来生产。在重组工序中，最普遍使用的生物是大肠杆菌。

相比于其它生物，我们大概对于细菌的生理和基因更为了解得多。然而，一个工序的成功与否通常依靠所述用基因工程技术制作的细菌的存活率和所述带有重要讯息以制做最后成品的重组脱氧核糖核酸。建构差劣的质粒可能不能够产生有意义数量的成品但同时降低所述用基因工程技术制作的细菌的存活率。而且，亦会有产生难以剔除的污染物和损害最终成品质量的风险。

发明内容

基于上述原因，本发明目的是提供一个更好的基因工程技术制作的细菌以生产人类精氨酸酶I，从而扩大所述精氨酸酶的产量，令所述方法安全及有效地制造出符合药品生产质量管理规范的材料。

因此，在一方面本发明是一分离并纯化的核酸分子用以表达重组人类精氨酸酶I。

在本发明的一优选实施例是使用所述核酸分子以建构用以表达重组人类精氨酸酶I的质粒。

在另一方面，本发明是使用所述质粒以建构一分离品种的大肠杆菌，用以制做重组人类精氨酸酶I。

附图说明

图1显示从已转化的感受态DH5(α)大肠杆菌细胞中萃取的质粒pET30(+)/ARGC的琼脂糖电泳分析。萃取后的pET30(+)/ARGC以限制性内切酶NdeI和XhoI酶解。预期中大小为1.4kb和5kb的片段显现。Lane M：λDNA/EcoRI+HindIII标记(MBI)；Lane1：以NdeI和XhoI双重酶解后的pET30a(+)/ARGC；Lane2：未经酶解的pET30a(+)/ARGC。

图2显示包含1,383个核酸的重组pET30(+)/ARGC中的插入核苷酸序列。

图3显示从已转化的感受态DH5(α)大肠杆菌细胞中萃取的质粒pET30(+)/ARGM的琼脂糖电泳分析。萃取后的pET30(+)/ARGM以限制性内切酶NdeI和XhoI酶解。预期中大小为1kb和5kb的片段显现。Lane M：λDNA/EcoRI+HindIII标记(MBI)；Lane1：以NdeI和XhoI双重酶解后的pET30a(+)/ARGM；Lane2：未经酶解的pET30a(+)/ARGM。

图4显示包含993个核酸的重组pET30(+)/ARGM中的插入核苷酸序列，其中包括2套终止密码子TAA。

图5显示由pET30a(+)/ARGM的核苷酸序列中的993个核酸编码区域推论出的蛋白序列。所述已表达的人类精氨酸酶I蛋白是一322氨基酸残基加上起始的甲硫氨酸和6个组氨酸标记的蛋白，或总共329氨基酸残基。

图6显示所述以BL21(DE3)表达的pAED-4/ARGC的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。Lane M：低分子量蛋白标记；Lane1：没有IPTG诱导的重组人类精氨酸酶I；Lane2：诱导后一小时；Lane3：诱导后2小时；Lane4：诱导后3小时；Lane5：诱导后4小时；Lane6：诱导后5小时。

图7显示所述以BL21(DE3)表达的pET30a(+)/ARGC的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。Lane M：低分子量蛋白标记；Lane1：没有IPTG诱导的重组人类精氨酸酶I；Lane2：诱导后一小时；Lane3：诱导后2小时；Lane4：诱导后3小时；Lane5：诱导后4小时；Lane6：诱导后5小时。

图8显示所述以BL21(DE3)表达的pET30a(+)/ARGM的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。Lane M：低分子量蛋白标记；Lane P：纯人类精氨酸酶I；Lane1：没有IPTG诱导的重组人类精氨酸酶I；Lane2：诱导后一小时；Lane3：诱导后2小时；Lane4：诱导后3小时；Lane5：诱导后4小时；Lane6：诱导后5小时。

具体实施方式

实施例1：建构pET30a(+)/ARGC质粒