[发明专利]针对人抗苗勒激素Ⅱ型受体（AMHR-Ⅱ）的单克隆抗体

说明书

技术领域

本发明涉及直接针对人抗苗勒激素II型受体(AMHR-II) 的单克隆抗体及其片段以及它们在治疗和诊断癌症(如卵巢癌)中的应用。

背景技术

卵巢癌是妇科恶性肿瘤的重要原因，是妇女癌症相关死亡的第五大主要 原因。平均发病率为每100000人中约10人，全欧洲共有1-2％的妇女在某 个年龄阶段发生卵巢癌(Black RJ et al.1997)。

颗粒细胞肿瘤(GCT)约占卵巢恶性瘤的5％，占卵巢性索间质瘤(ovarian sex cord-stromal tumours)的70％。尽管在疾病最初几年中它们的恶化可能 性相对较低，但可能在手术切除原发瘤后直到30年才出现复发(Singh-Ranger G et al.2004)。如果早期作出诊断，在肿瘤扩散出腹膜之前，通过手术彻底 切除可明显地改善预后复发(Dutertre M.et al.，2001)。

上皮卵巢癌约占所有卵巢肿瘤的80％。若在早期诊断出这类癌，存活率 约为90％。不幸的是，在诊断中，大约75％的妇女普遍发生腹内疾病扩散 (美国癌症学会的实例和图片。2001 www.cancer.org)。在这些病例中，通 过适当治疗，存活率约为20-25％(Rapkiewicz AV.et al.2004)。

提出了针对上皮卵巢癌的一些分子标记，尤其是循环形式的癌抗原125 (CA125或MUC16)，它在约80％的这类肿瘤中过度表达。但是它的进化 水平与月经和良性条件(如子宫内膜异位症或肝病)相关。

用于上皮卵巢癌的主要治疗策略是外科手术和化学疗法。例如，通常以 顺铂类化学疗法治疗卵巢癌，但由于获得的顺铂抗性而使其经常复发(Yahata， H.et al.，2002)。尽管大部分患者一开始能对铂和紫杉醇化学疗法作出反应， 包括完全缓解，但复发率约为85％(Gordon AN et al.2004)。基于激素、抗 生成血管因子和单克隆抗体的新靶向疗法已经快速发展起来。单克隆抗体包 括奥戈伏单抗(oregovomab)(OvaRex，AltaRex)，该奥戈伏单抗是一种直接 针对CA125的研究型鼠单克隆抗体，目前被用于免疫治疗的临床试验(Berek JS et al.2004)；和西妥昔单抗(cetuximab)，该西妥昔单抗是直接针对表皮 生长因子受体(EGFR)的，在30-70％的上皮卵巢癌中有表达(Ozols RF et al. 2004)。

因而，对用于治疗卵巢癌的新治疗剂存在大量的需求。此外，明确需要 对作为用于诊断活体受试者卵巢癌的灵敏的和特异性的生物标记的新卵巢 癌相关蛋白进行识别。

抗苗勒激素II型受体参与了与男性生殖系统的发育相关的苗勒胆管的 退化。该受体在人上皮卵巢癌细胞中频繁表达。对于已经证实的AMH抑制 卵巢癌细胞生长的能力，AMHR-II可构成有价值的靶点以用在基于抗体的免 疫疗法中。

通过小鼠种系的遗传操作，研究了动物模型中的AMHR-II表达。Dutertre 等(2001)报导了功能型AMHR-II在颗粒细胞卵巢肿瘤中的表达，所述颗粒细 胞卵巢肿瘤源于使用AMH启动子SV40癌基因构建体通过定向致癌基因而 获得的转基因小鼠。在新近研发的小鼠模型中，Conolly等(2003)使用相同的 癌基因构建体，在控制AMHR-II 5’上游调控序列的情况下，证实了约50％ 的雌小鼠发生了上皮卵巢癌。Masiakos等(1999)也证实了在人上皮卵巢癌细 胞株中以及从卵巢癌患者和形成固体肿瘤的患者中分离出的腹水细胞(ascite cells)样品中表达有AMHR-II。这些研究者还报导了在源于其它组织(如乳 腺(Segev DL et al；2000)或前列腺(Segev DL et al.2002))的癌细胞株中 表达有AMHR-II。这些数据表明了在人类癌症，尤其在卵巢肿瘤中AMHR-II 具有非常特异性的分布。

2004年，Salhi等开发并表征了直接针对人AMHR-II的单克隆抗体 (mAb)，并采用免疫组织化学(IHC)通过人颗粒细胞肿瘤(GCTs)和人睾丸中的 塞尔托利(Sertoli)和莱迪希(Leydig)细胞，证实了AMHR-II的强表达。 他们还清楚地显示了mAb 12G4在高水平表达有天然配体(AMH)的颗粒细胞 中的非竞争性结合，从而实现mAb 12G4在表达有AMHR-II的肿瘤中的体 内应用。