[发明专利]用于数字多重PCR测定的装置和方法

权利要求书

1.一种方法，该方法用于在微流控芯片的多个通道内进行数字多重PCR测定以鉴定多个患者样品的每一个中的DNA序列变异，从而诊断疾病状态、疾病风险或预测各患者的治疗性药物的反应，所述方法包括：

A.对于各患者样品，在通道之一中提供基因组DNA样品流；

B.将测定特异性试剂溶液导入基因组DNA样品流以形成受试混合物；

C.在通道内对受试混合物进行PCR方法；

D.在进行PCR方法后对受试样品进行热解链方法；

E.收集关于热解链方法的数据；

F.分析收集的热解链数据以确定目的DNA序列变异在受试混合物中的存在或不存在；和

G.通过指定表明目的DNA序列变异存在的结果为1和指定表明目的DNA序列变异不存在的结果为0或反之亦然，来将分析步骤的结果转换成数字信号。

2.权利要求1的方法，其还包括：

H.使用相同的测定特异性试剂溶液重复步骤B至G至少一次以提高目的DNA序列变异的存在或不存在的测定的可靠性。

3.权利要求2的方法，其还包括：

I.使用适合于鉴定与诊断或预测相关的不同的DNA序列变异的不同的测定特异性试剂溶液重复步骤B至H至少一次；和

J.对步骤B至I的结果进行统计分析以推断出诊断或预测以及诊断或预测的可靠性水平。

4.权利要求1的方法，其中收集关于热解链方法的数据的步骤包括当进行热解链方法时收集来自受试混合物的荧光特征数据。

5.权利要求4的方法，其中步骤D包括坡升受试混合物团的温度以及步骤E包括产生信号强度对温度的相关性。

6.权利要求5的方法，其中步骤F包括将所述相关性与预先确定的预期的相关性相比较并且根据所述相关性与预期的相关性的偏差评估结果。

7.权利要求4的方法，其中荧光特征包括由受试混合物团发射的荧光。

8.权利要求6的方法，其中产生信号强度对温度的相关性包括绘制各受试混合物团的荧光对温度曲线，并且比较步骤包括将各荧光对温度曲线的形状与预期的荧光对温度曲线的形状进行比较。

9.权利要求6的方法，其中产生信号强度对温度的相关性包括绘制各受试混合物团的荧光对温度曲线，并且比较步骤包括将荧光下降至预先确定的水平时所处的温度与预期的荧光下降至所述预先确定的水平时所处的温度相比较。

10.权利要求1的方法，其中流体芯片是微流控芯片，其包含：

各反应通道的相对末端上的样品池和废液池；

吸浆管；和

从吸浆管散发并且将吸浆管与所述多个反应通道的每一个连接并且经设计将通过吸浆管汲取的物质分配至反应通道的每一个中的通道网络。

11.权利要求1的方法，其中步骤B包括将一定量的试剂材料和缓冲材料交替地导入每一个通道，从而沿着各通道的长度形成包含与载体液顺序交替的受试溶液团的连续流，其中受试溶液包含样品和试剂材料的混合物，而载体液包含样品和缓冲材料的混合物。

12.权利要求1的方法，其中可靠性水平是所进行的不同测定的数目的函数。

13.权利要求1的方法，其中可靠性水平是重复各测定的次数的函数。

14.权利要求1的方法，其中确定DNA序列变异的存在或不存在包括确定单核苷酸多态性的存在或不存在。