[发明专利]使用不需要钙黏着蛋白受体的毒素遏制昆虫对苏云金芽孢杆菌CRY毒素的抗性

权利要求书

1.一种分离的DNA片段，其由编码修饰的3-结构域Cry1A亚家族毒素 的编码区组成，其中，所编码的修饰的3-结构域Cry1A毒素缺少α-1螺旋但 保持α-2螺旋并因此能够杀死合格的抗性昆虫、遏制它们对未修饰的Cry1A 亚家族毒素的抗性。

2.根据权利要求1所述的分离的DNA片段，其中，所述修饰的3-结构 域Cry1A亚家族毒素选自由被修饰以使它们缺少α-1螺旋但保持α-2螺旋的 来自亚家族Cry1Ab和Cry1Ac的所有3-结构域Cry毒素组成的组。

3.一种分子载体，其包含根据权利要求1所述的分离的DNA片段。

4.根据权利要求3所述的分子载体，其中，所述载体是可在苏云金芽孢 杆菌和大肠杆菌细胞中复制的穿梭载体。

5.根据权利要求3所述的分子载体，其中，所述载体是适于在植物细胞 中转化和表达的载体。

6.一种遗传修饰的宿主细胞，其中所述宿主细胞是细菌细胞，且其中， 所述宿主细胞包含根据权利要求1所述的DNA片段。

7.一种遗传改造的修饰的3-结构域Cry1A亚家族毒素，其缺少α-1螺 旋但保持α-2螺旋。

8.根据权利要求7所述的修饰的3-结构域Cry1A亚家族毒素，其中， 其是被遗传改造以使它们缺少α-1螺旋但保持α-2螺旋的3-结构域Cry1A亚 家族毒素，选自由缺少α-1螺旋但保持α-2螺旋的来自亚家族Cry1Ab和 Cry1Ac的所有3-结构域Cry毒素组成的组。

9.一种获得遗传改造的缺少α-1螺旋但保持α-2螺旋的修饰的3-结构域 Cry1A亚家族毒素的方法，其中，所述方法包括以下步骤：

a)培养包含DNA构建体的遗传修饰的宿主细胞，其中所述DNA构建 体编码遗传改造的缺少α-1螺旋但保持α-2螺旋的修饰的3-结构域Cry1A亚 家族毒素，所述培养在适于允许表达所述修饰的3-结构域Cry1A亚家族毒素 的条件下进行，和任选地

b)分离所述修饰的3-结构域Cry1A亚家族毒素，和任选地

c)纯化所述分离的修饰的3-结构域Cry1A亚家族毒素。

10.一种杀死合格的抗性昆虫以遏制它们的抗性的组合物，其含有足以 控制靶害虫的量的一种或多种遗传改造的缺少α-1螺旋但保持α-2螺旋的修 饰的3-结构域Cry1A亚家族毒素，以及农业和生态可接受的赋形剂的混合物， 其中，所述修饰的3-结构域Cry1A亚家族毒素的量为按重量计0.0001％至 95％。

11.一种遏制合格的抗性昆虫的抗性的方法，其包括使所述合格的抗性 昆虫食用致死剂量的遗传改造的杀死合格的抗性昆虫的缺少α-1螺旋但保持 α-2螺旋的修饰的3-结构域Cry1A亚家族毒素的步骤。

12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述修饰的3-结构域Cry1A 亚家族毒素作为组合物的一部分被食用。

13.根据权利要求11所述的方法，其中，所述修饰的3-结构域Cry1A 亚家族毒素存在于转基因植物中。