[发明专利]结缕草中胁迫诱导型启动子Rd29A的克隆和功能鉴定无效

专利信息
申请号: 200810000775.3 申请日: 2008-01-16
公开(公告)号: CN101381723A 公开(公告)日: 2009-03-11
发明(设计)人: 韩烈保;王莹;曾会明;刘君 申请(专利权)人: 北京林业大学;韩烈保;王莹
主分类号: C12N15/10 分类号: C12N15/10;C12N15/29;C12N15/82;C12Q1/68
代理公司: 北京路浩知识产权代理有限公司 代理人: 王朋飞
地址: 100083*** 国省代码: 北京;11
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摘要:
搜索关键词: 结缕草中 胁迫 诱导 启动子 rd29a 克隆 功能 鉴定
【权利要求书】:

1.结缕草胁迫诱导型启动子Rd29A的克隆及功能鉴定方法,其 包括如下步骤:

(1)提取结缕草的总DNA;

(2)根据已经在GenBank上发布的Rd29A启动子的序列设计一对 特异引物,引入合适的酶切位点,通过PCR扩增出Rd29A启 动子基因片断,并进行测序分析,所述特异引物的5’端分别引 入了Hind III和BamH I的酶切位点,所述引物核苷酸序列分别 为P1:5′-AAGCTTCTGCAAGAATCTCAAACACG-3′和P2: 5′-GGATCCTCCAATAGAAGTAATCAAACC-3′;

(3)以pBI121表达载体为基础,构建由结缕草Rd29A启动子驱动 的GFP基因的植物表达载体;

(4)鉴定结缕草Rd29A启动子的功能。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,其中步骤(2)PCR 产物的长度为814bp,其核苷酸序列在GenBank上的登录号为: EU346948。

3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,其中步骤(4)鉴定 结缕草Rd29A启动子功能的方法是采用基因枪法对洋葱表皮细胞进 行转化,检测Rd29A启动子在受体细胞中调控GFP基因表达的活性。

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