[发明专利]结缕草中胁迫诱导型启动子Rd29A的克隆和功能鉴定无效
申请号: | 200810000775.3 | 申请日: | 2008-01-16 |
公开(公告)号: | CN101381723A | 公开(公告)日: | 2009-03-11 |
发明(设计)人: | 韩烈保;王莹;曾会明;刘君 | 申请(专利权)人: | 北京林业大学;韩烈保;王莹 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C12N15/29;C12N15/82;C12Q1/68 |
代理公司: | 北京路浩知识产权代理有限公司 | 代理人: | 王朋飞 |
地址: | 100083*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 结缕草中 胁迫 诱导 启动子 rd29a 克隆 功能 鉴定 | ||
1.结缕草胁迫诱导型启动子Rd29A的克隆及功能鉴定方法,其 包括如下步骤:
(1)提取结缕草的总DNA;
(2)根据已经在GenBank上发布的Rd29A启动子的序列设计一对 特异引物,引入合适的酶切位点,通过PCR扩增出Rd29A启 动子基因片断,并进行测序分析,所述特异引物的5’端分别引 入了Hind III和BamH I的酶切位点,所述引物核苷酸序列分别 为P1:5′-AAGCTTCTGCAAGAATCTCAAACACG-3′和P2: 5′-GGATCCTCCAATAGAAGTAATCAAACC-3′;
(3)以pBI121表达载体为基础,构建由结缕草Rd29A启动子驱动 的GFP基因的植物表达载体;
(4)鉴定结缕草Rd29A启动子的功能。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,其中步骤(2)PCR 产物的长度为814bp,其核苷酸序列在GenBank上的登录号为: EU346948。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,其中步骤(4)鉴定 结缕草Rd29A启动子功能的方法是采用基因枪法对洋葱表皮细胞进 行转化,检测Rd29A启动子在受体细胞中调控GFP基因表达的活性。
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