[发明专利]人乳头瘤病毒预防性疫苗、构建方法及应用无效

专利信息
申请号: 200810006488.3 申请日: 2008-02-29
公开(公告)号: CN101518647A 公开(公告)日: 2009-09-02
发明(设计)人: 常小迦;孙世章 申请(专利权)人: 江阴艾托金生物技术有限公司;常小迦;孙世章
主分类号: A61K39/295 分类号: A61K39/295;A61K38/08;A61K38/16;A61K39/12;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/79;A61P31/20;A61P35/00;A61P37/00
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 214400*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 乳头 病毒 预防性 疫苗 构建 方法 应用
【权利要求书】:

1.一种抗人乳头瘤病毒HPV的多价疫苗,其特征是:所述的抗原属多价嵌合蛋白,其氨基酸序列来自于HPV病毒型6、11、16、18、33、52、58,其嵌合蛋白分子由相关HPV病毒型的外壳蛋白与一种以上的有特异免疫活性的短肽相联接,构建为嵌合蛋白。

2.根据权利要求1所述的抗HPV疫苗,其特征是:所述的含有相关HPV病毒型的外壳蛋白为L1和L2,其氨基酸序列为SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:02,SEQ ID NO:03,SEQ ID NO:04,SEQ ID NO:05,SEQ IDNO:06,SEQ ID NO:07,SEQ ID NO:08,SEQ ID NO:09,SEQ ID NO:10,SEQ ID NO:11,SEQ ID NO:12,SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14。

3.根据权利要求1所述的抗HPV疫苗,其特征是:所述的免疫活性短肽为具有激话T-免疫细胞功能的抗原决定基(CTL epitope)VL1-CTL165-173,其氨基酸序列为SEQ ID NO:15。

4.根据权利要求1所述的抗HPV疫苗,其特征是:所述的免疫活性短还包括具有对多种HPV亚型有广谱的交叉免疫功能的抗原决定基(antigenic epitope)VL217-37,其氨基酸序列为SEQ ID NO:16。

5.一种抗HPV疫苗的构建方法,包括嵌合蛋白抗原构建、将嵌合蛋白的基因序列在真核细胞中表达,其特征是:相关HPV病毒的基因序列按真核细胞的偏爱密码子优化,其优化后的DNA序列用化学方法合成再构建成真核表达载体,其优化后的DNA序列与HPV病毒基因组野生型的核酸序列有不小于75%的同源性。

6.根据权利要求5所述的HPV疫苗的构建方法,为达到在寄主细胞中最高表达的目的,在不影响VLP形成的条件下,对HPV外壳蛋白做一种以上的优化修饰,其修饰方法包括去除N-端的1到10个氨基酸,或者C-端的10到35个氨基酸。

7.根据权利要求5所述的真核细胞表达系统可以是酵母,可以是植物,可以是昆虫细胞,也可以是哺乳类动物细胞;在此举例,相关HPV嵌合蛋白在酵母(汉逊Hasenula polymorpha)中达到蛋白的高表达。其HPV病毒的基因序列根据汉逊酵母所偏爱的密码子所优化后,构建酵母表达载体:pHFMDGA-VL1/2-HPV6,pHFMDGA-VL1/2-HPV11,pHFMDGA-VL1/2-HPV16,pHFMDGA-VL1/2-HPV18,pHFMDGA-VL1/2-HPV33,pHFMDGA-VL1/2-HPV52,pHFMDGA-VL1/2-HPV58。

8.根据权利要求5所述的抗HPV疫苗的构建方法,其特征是:由HPVL1外壳蛋白和短肽VL1-CTL165-173,VL217-37组成的嵌合蛋白,用分子生物工程学的方法将其基因片段融合,再克隆到适当的真核表达载体中,以此达到在真核细胞中生产HPV嵌合蛋白的目的。

9.根据权利要求6或7所述的抗HPV疫苗,其特征是:所构建的有HPVL1外壳蛋白与附加短肽VL1-CTL165-173,VL217-37组成的嵌合蛋白,由真核细胞寄主内表达,所产生的嵌合蛋白可形成病毒样颗粒VLPs。

10.权利要求9的用途,其VLPs用作疫苗,在机体中诱发免疫应答,从血清中可测试到特异性抗HPV6、11、16、18、33、52、58的IgG和IgA,从呼吸道和生殖道所分泌的液体中可测试到特异性抗HPV6、11、16、18、33、52、58的IgA,其中机体中产生的IgG,IgA的浓度与只用安慰剂的对照组比较,要提高50%以上。

11.权利要求9的用途,其VLPs用作疫苗,在机体中激发特异性T-免疫细胞的话性,激活后的特异性T-免疫细胞可导致受HPV病毒感染的细胞的消失或减少。

12.一种上述的抗HPV多价疫苗,可应用为预防性疫苗,在防止HPV病毒感染所导致的病变,相关癌症及尖锐湿疣类性病,特别是用于预防多种HPV病毒所导致的感染及病变方面的保护作用。

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