[发明专利]人乳头瘤病毒预防性疫苗、构建方法及应用

说明书

技术领域：

本发明涉及一种用分子生物工程学的方法生产人乳头瘤病毒疫苗，用于预防宫颈癌，其它一些由HPV感染引起的恶性肿瘤，及与性病有关的尖锐湿疣。具体而言，本发明涉及病毒靶点的基因片段的选择及综合使用，以达到最强抗病毒效应。本发明还涉及修饰和优化病毒基因序列，以达到蛋白分子在真核寄主细胞中最高表达，并成功制备成具有免疫活性的疫苗抗原。本发明涉及的抗HPV病毒疫苗包括HPV亚型：HPV6、11、16、18、33、52、58，其外壳蛋白抗原L1，L2及有特异免疫活性功能的抗原决定基短肽。

发明背景：

宫颈癌是全世界妇女健康的一个主要问题，临床实验、分子生物学研究和病源学研究表明，人乳头瘤病毒(HPV)感染是宫颈癌和尖锐湿疣发病的主要因素。全世界每年都有470 000例宫颈癌患者被诊断出来。生殖道的HPV感染是一种常见的性传播疾病。在美国，大约有2千万人随时被感染，也能随时传给他人，政府每年要花费约60亿美元对全国人口进行尖锐湿疣的诊断筛选和治疗工作。宫颈癌的发病率虽下降了很多，但2005年还是约有3710例病人死于宫颈癌。在发展中国家，大多数妇女因得宫颈癌死亡的机率紧次于乳腺癌，通过外科手术的治疗并不能完全根治。所以，研发HPV基因工程疫苗是预防和治疗宫颈癌和其它一些与HPV相关的恶性肿瘤的一个重要手段。

HPV共有100多种，寄主是人类。多数HPV只导致皮肤疾病，上呼吸道系统疾病。40种HPV是由性交传染。可导致癌症的HPV有十几种(高危险型)。大量的调查显示97％宫颈癌中都可检测到HPV，其中HPV16和HPV18亚型与宫颈癌的发生高度相关。除宫颈癌以外，HPV还与其它癌症的发生高度相关，例如：口腔，食管癌，头颈癌，直肠，肛门癌，肺癌，及乳腺癌等。而HPV6和HPV11与性交传染病，尖锐湿疣的发生密切相关。一种病变可能是由多个型别的HPV感染所致，因此开发针对多型别HPV病毒的多价疫苗具有重大意义，这也是目前HPV疫苗研究的一大挑战和一次艰巨的任务。

发明内容：

本发明的目的是提供一种可作为多价的预防几种最常见及危害性最大的HPV病毒亚型的疫苗。

上述的目的通过以下的技术方案实现：

人乳头瘤病毒疫苗，所述的抗原包括五种致癌高危险型病毒HPV-16、HPV-18、HPV-33、HPV-52和HPV-58的蛋白抗原和两种尖锐湿疣病毒亚型HPV-6、HPV-11的蛋白抗原，由含有七种HPV病毒型的L1外壳蛋白和有特异抗HPV免疫活性的短肽相联接，构建为嵌合重组蛋白，在细胞内或细胞外形成病毒样颗粒VLPs。

所述的人乳头瘤病毒疫苗，其所述的含有七种HPV病毒型的L1外壳蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO：01(L1Human papillomavirus type6)，SEQID NO：02(L1 Human papillomavirus type 11)，SEQ ID NO：03(L1 Human papillomavirus type 16)，SEQ ID NO：04(L1 Humanpapillomavirus type 18)，SEQ ID NO：05(L1 Human papillomavirustype 33)，SEQ ID NO：06(L1 Human papillomavirus type 52)和SEQ ID NO：07(L1 Human papillomavirus type 58)。

所述的人乳头瘤病毒疫苗，所述的免疫活性短肽VL1-CTL_165-173和VL2_17-37，其氨基酸序列为SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16。

一种人乳头瘤病毒疫苗的构建方法，包括七价嵌合重组蛋白抗原构建、将嵌合蛋白表达载体在酵母中，其中的七价重组蛋白抗原按汉逊酵母密码子优化后的基因序列构造表达载体。

所述的人乳头瘤病毒疫苗的构建方法，由HPV L1外壳蛋白和短肽VL1-CTL_165-173，VL2_17-37组成的嵌合蛋白，用分子生物工程学的方法将其基因序列克隆到酵母表达载体中，以此表达载体在酵母中，生产HPV重组嵌合蛋白。