[发明专利]蛭弧菌在消除淡水产品及其养殖水体中致病菌的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及细菌及其应用，具体是指蛭弧菌在消除淡水产品及其养殖水体中致病菌的应用，特别适用于消除淡水产品食用或加工前、运输过程及其养殖水体中携带的致病菌。

背景技术

蛭弧菌(Bdellovibrio)是由Stolp和Petzhold从菜豆叶烧病假单胞菌ATCC11355中分离发现的一类以攻击和裂解其它细菌来完成自身生长和繁殖的寄生菌。蛭弧菌具有类似噬菌体的功能，对能导致渔业养殖病害和人类食物中毒的致病菌具有良好的裂解清除效果，但对动植物无毒副作用。

嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、恶臭假单胞菌(Pseudomonasputida)、迟缓爱德华菌(Edwardsiella tarda)及大肠杆菌(Escherichia coli)都是可引起人类食物中毒的致病菌，淡水产品是其食源性感染最为重要的传播媒介。淡水产品所携带的致病菌，除了引发人类食物中毒外，也可引发淡水产品本身在养殖期间的病害。为了控制淡水鱼虾贝蟹细菌性病害，养殖厂家不得不使用抗生素，如此又导致渔药的残留。药物的残留超标，给我国淡水产品的出口带来了极大的压力。

对于淡水产品中致病菌的清除，目前仍多采用物理或化学药物的方法，但物理或化学药物的方法均有其明显的弊端。各种抗生素的滥用，导致了致病菌对抗生素的抗性。开发研制新型抗生素不但费用高昂且研制周期长。物理的方法则只能应用到“从源头到餐桌”的某一环节，而非全过程。然而，蛭弧菌作为一类具有裂解致病菌的特殊细菌，不仅可应用到淡水产品生产的全过程，而且也不会导致细菌出现抗性，也无噬菌体宿主过于专一的缺点，因此蛭弧菌作为一类致病菌的生物消除剂具有相当的优势。

如能在淡水产品在养殖期间、运输过程或食用、加工前，先进行致病菌的生物消除工作，则一方面可以减少或消除食物中毒的机率，减少或消除药物残留的可能，提高产品质量安全系数，保护消费者的健康，另一方面也可为淡水产品的加工提供优质原材料和加工上的便利，为出口创汇提供强有力的保障。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的弊端，通过研发找出适用于消除淡水产品致病菌的蛭弧菌，提供一种蛭弧菌在消除淡水产品及其养殖水体中致病菌的应用，特别适用于消除淡水产品食用或加工前、运输过程及其养殖水体中携带的致病菌。

为了达到上述目的，本发明的主要技术方案如下：

蛭弧菌在消除淡水产品及其养殖水体中致病菌的应用，应用方法包括以下具体步骤及其条件：

步骤一：蛭弧菌的分离纯化

对采集的淡水或底泥进行预处理，接种增殖蛭弧菌的嗜水气单胞菌，倒双层平板，在含宿主菌的双层平板上出现噬菌斑，挑取不断扩大的单斑，再按微生物学方法液体增殖培养、双层平板检验，再次挑取不断扩大的单斑，并重复若干次，至单噬菌斑传代形成形状、大小、透明度均一致的噬菌斑为一株蛭弧菌纯菌株，按同一时间内单斑大小计，可分离出若干株蛭弧菌纯菌株；所述蛭弧菌保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为BDF01 CCTCC M 208008、BDF02 CCTCC M 208009、BDF03 CCTCC M208010；

步骤二：蛭弧菌浓缩液的制备

将若干株蛭弧菌分别进行发酵培养，分别制成浓度为10¹¹～10¹³pfu/ml的蛭弧菌浓缩液，待用；

步骤三：蛭弧菌在消除淡水产品携带的致病菌中的应用

在污染了致病菌的淡水产品养殖水体中、食用前、加工或运输过程中加入步骤二制备的蛭弧菌浓缩液，使蛭弧菌的浓度至少达到10³pfu/ml。

所述蛭弧菌包括蛭弧菌游泳体和蛭弧菌蛭质体。

所述应用方法采用2株或2株以上的蛭弧菌混合使用，效果更佳。

所述应用方法特别适用于消除食用或加工前淡水产品携带的致病菌，应用时蛭弧菌游泳体最佳浓度范围为10⁵～10¹³pfu/ml。

所述应用方法还适用于消除淡水产品运输过程中的致病菌，应用时蛭弧菌游泳体最佳浓度范围为10⁴～10¹²pfu/ml。

所述应用方法还适用于消除淡水产品养殖水体中的致病菌，应用时蛭弧菌游泳体最佳浓度范围则为10³～10⁷pfu/ml。

本发明蛭弧菌在消除淡水产品在食用前、运输过程中及其养殖水体致病菌的应用效果如下：