[发明专利]一种拟丽突线虫的培养方法

权利要求书

1.一种拟丽突线虫的培养方法，其特征在于：将大肠杆菌E.coli菌株用接种环挑取，接入40～60mL 液体的牛肉膏蛋白胨培养基上，每次接种大肠杆菌数量为1×10⁷～3×10⁷个，放进具有恒温功能的摇床，调节摇床温度36.5～37.5℃、摇动次数设置为165～175次/分钟，振荡培养23～25小时，得到细菌液；然后，将细菌液加入到线虫培养基，细菌液/线虫培养基为1/50的体积比例再挑入消过毒的无菌的拟丽突线虫，置于恒温恒湿培养箱，在湿度50～60％、温度20～30℃条件下培养5～11天，即可得到所培养的线虫。

2.根据权利要求1所述的拟丽突线虫的培养方法，其特征在于：所述大肠杆菌E.coli菌株为普通野生型大肠杆菌，菌株属于革兰氏阴性短杆菌，大小0.5×1～3微米，周身鞭毛，能运动，无芽孢。

3.根据权利要求1所述的拟丽突线虫的培养方法，其特征在于：所述的液体牛肉膏蛋白胨培养基按重量计为：牛肉膏5g、蛋白胨10.0g、NaCl 5g、蒸馏水1000mL，最后用2mol/LNaOH调节pH为6.5～7.5。

4.根据权利要求1所述的拟丽突线虫的培养方法，其特征在于：所述的线虫培养基按重量计为：3g NaCl、17g琼脂、2.5g蛋白胨，溶于975mL蒸馏水中，120～122℃灭菌，29.5～30.5分钟后分别加入5mg/mL胆固醇贮存液1mL、1mol/L CaCl₂1mL、1mol/L MgSO₄1mL、pH为5.9～6.1的1mol/L磷酸缓冲液25mL，摇动均匀，即得线虫培养基。

5.根据权利要求1所述的拟丽突线虫的培养方法，其特征在于：所述的拟丽突线虫的培养步骤为，取干净的直径为6cm的培养皿，将线虫培养基4～6mL平铺在培养皿中，静置8～10小时，用微量移液器按细菌液/培养基为1/50的体积比例，将细菌液80～120μL倒入培养皿，静置3～5分钟，用接种针挑入无菌拟丽突线虫10～20条，均匀放置在培养基上，盖上培养皿盖子；然后，将培养皿置于恒温恒湿培养箱，在湿度50～60％、20～30℃培养5～11天，即可得到所培养的线虫。