[发明专利]一种以敌敌畏为底物的降解菌株的筛选方法

权利要求书

1.一种以敌敌畏为底物的降解菌株的筛选方法，其特征在于：

1)降解菌的富集驯化：将2-4g菌样接种于含敌敌畏的100-150 mL富集培养基中进行转接培养，每次转接培养条件为30-35℃、 150-200r/min摇床培养5-7天，共转接4-5次，转接量按体积百分比 计每次培养液8-10％接种于含敌敌畏逐渐增加的100-150ml富集培养 基中，待用；其中敌敌畏每次以100-150mg/L逐渐增加；

2)分离筛选：取步骤1)中培养的菌液驯化液，稀释10⁴-10⁵后， 涂布于牛肉膏蛋白胨固体平板上，30-35℃恒温倒置培养3-4天；

3)降解菌复筛：将步骤2)中生长的菌株在含敌敌畏为惟一碳源 的选择性无机盐培养基固体平板上划线分离，30-35℃培养4-5天， 选择性无机盐培养基上能够生长的菌株即为能够以敌敌畏为唯一碳 源的降解菌株；

所述富集培养基的组成为：MgSO₄·7H₂O 0.20-0.25g，(NH₄)₂SO₄0.50-0.6g，KH₂PO₄ 0.50-0.6g，NaCl 1.0-1.2g，K₂HPO₄ 1.50-1.6g， 敌敌畏分别为100-500mg，加蒸馏水至1000ml，调pH至7.0-7.5；

所述牛肉膏蛋白胨培养基的组成为：牛肉膏5.0-6.0g，蛋白胨 10.0-11.0g，NaCl 10.0-11.0g，琼脂15.0～20.0g，加蒸馏水至1000ml， pH＝7.0-7.5；

所述选择性培养基的配方为：MgSO₄·7H₂O 0.20-0.25g，(NH₄)₂SO₄0.50-0.6g，KH₂PO₄ 0.50-0.6g，NaCl 1.0-1.2g，K₂HPO₄ 1.50-1.6g， 敌敌畏为300-350mg，琼脂15.0-20.0g，加蒸馏水至1000ml，调pH 至7.0-7.5。