[发明专利]一种以敌敌畏为底物的降解菌株的筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物降解农药残留技术领域，具体地说是一种以敌敌 畏为底物的降解菌株的筛选方法。

背景技术

敌敌畏，又名DDVP，有机磷杀虫剂的一种，化学名称：2，2-二氯乙 烯基二甲基磷酸酯(2，2-Dichlorovinyl dimethyl phosphate).分子 式C₄H₇Cl₂O₄P，分子量为分子量220.98，化学结构式为：

敌敌畏是广谱性杀虫、杀螨剂，具有高效、低毒、广谱、用量少、 价格低廉等优点，是目前广泛用于蔬菜、果树和多种农田作物的主要杀 虫剂之一。敌敌畏在水溶液中缓慢分解，遇碱分解加快，对热稳定， 对铁有腐蚀性。对人畜中毒，对鱼类毒性较高，对蜜蜂剧毒。敌敌畏 不易被土壤颗粒吸附。因此，可能污染地下水，由于其对环境和食品 安全造成的危害，解决敌敌畏残留的降解问题已成为当前农残降解领 域研究的热点之一。

目前，国内外主要采取一系列化学方法降解残留敌敌畏，沸石负 载TiO2光催化法等，但是化学处理方法价格高，且易造成二次污染。 由于生物处理法具有条件简便、处理彻底，以及不会造成二次污染等 特点而备受欢迎。因此，研制敌敌畏生物降解菌剂具有十分重要的意 义。

发明内容

本发明的目的是提供一种快速、高效的以敌敌畏为底物的降解菌 株的筛选方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

1)将2-4g菌样接种于含敌敌畏的100-150mL富集培养基中进行 转接培养，每次转接培养条件为30-35℃、150-200r/min摇床培养5-7 天，共转接4-5次，转接量按体积百分比计每次培养液8-10％接种于含 敌敌畏逐渐增加的100-150ml富集培养基中，待用；其中敌敌畏首次加 入量100-150mg/L，而后以100-150mg/L逐渐增加；

2)分离筛选：取步骤1)中培养的菌液驯化液，稀释10⁴-10⁵后， 涂布于牛肉膏蛋白胨固体平板上，30-35℃恒温倒置培养3-4天；

3)降解菌复筛：将步骤2)中生长的菌株在含敌敌畏为惟一碳源的 选择性无机盐培养基固体平板上划线分离，30-35℃培养4-5天，能够 生长的菌株即为能够以敌敌畏为唯一碳源的降解菌株。

所述富集培养基的组成为：MgSO₄·7H₂O 0.20-0.25g，(NH4)₂SO₄0.50-0.6g，KH₂PO₄ 0.50-0.6g，NaCl 1.0-1.2g，K₂HPO₄ 1.50-1.6g， 敌敌畏分别为100-500mg，加蒸馏水至1000ml，调pH至7.0-7.5；所 述牛肉膏蛋白胨培养基的组成为：牛肉膏5.0-6.0g，蛋白胨 10.0-11.0g，NaCl 10.0-11.0g，琼脂15.0-20.0g，加蒸馏水至1000ml， pH＝7.0-7.5；所述选择性培养基的配方为：MgSO₄·7H₂O 0.20-0.25g， (NH4)₂SO₄ 0.50-0.6g，KH₂PO₄ 0.50-0.6g，NaCl 1.0-1.2g，K₂HPO₄1.50-1.6g，敌敌畏为300-350mg，琼脂15.0-20.0g，加蒸馏水至 1000ml，调pH至7.0-7.5。