[发明专利]具有抗肿瘤活性的香菇发酵粗蛋白、提取方法及其制剂

权利要求书

1.具有抗肿瘤活性的香菇发酵粗蛋白，是以香菇C91-3的菌丝体经发酵、盐析、透析、干燥而得；为淡褐色或土黄色的粉末，可溶于水，有特定的香味，水溶液pH5.0～8.0，分子量为1KD～90KD，含有18种氨基酸和多种蛋白质。

2、具有抗肿瘤活性的香菇发酵粗蛋白的提取方法，其特征在于工艺步骤为：

I.香菇发酵液的制备

(1)将含有以下重量分的原料：葡萄糖0.5～15、蔗糖0.5～15、蛋白胨0.5～10、VB10.001～1、新鲜啤酒酵母1～16、全脂奶粉0.5～10、磷酸二氢钾0.1～5、VB20.001～1和1000重量份蒸馏水中混合在20～60℃水浴中，使其完全溶解，调节pH5.0～8.0，分装至300ml三角烧瓶中，每瓶250ml，用4层纱布外盖一层牛皮纸封口，消毒灭菌15～20min，冷却后备用；

(2)取7～10天生长良好的香菇C91-3的菌丝体，接种到上述的培养基中，每瓶接种菌丝体0.5～15g；

(3)置室温摇床上培养，前两天50～100转/分，第三天开始逐渐加转速至100～150转/分。每天观察生长情况，无菌取少量培养物观察孢子数，如果孢子数达到10⁵～10¹⁰/ml时停止培养，收集发酵液备用；

(4)将发酵液在0～8℃、3,000g/min离心10min，收集上清液，然后在0～8℃下以单层滤纸过滤上清液除去其中悬浮的杂质，并将所得的上清液为不透明的淡褐色或土黄色，在0～8℃的下保存；

II.香菇发酵粗蛋白的制备：

(1)在0～8℃缓慢盐析发酵液，搅拌下直到过饱和时为止，静置20min后，0～8℃下离心30min，收集沉淀；

(2)将沉淀置于透析袋中，以去离子水作为透析缓冲液，0～8℃下透析，每30min更换一次缓冲液，直至除去全部的盐，于-20℃冰箱保存；

(3)将脱盐后的蛋白质溶液经过真空冷冻干燥机浓缩冻干得香菇发酵粗蛋白固体原粉。

3、具有抗肿瘤活性的香菇发酵粗蛋白制剂，其特征在于将香菇发酵粗蛋白冻干原粉与赋形剂按比例制成成各种口服剂型。

4、根据权利要求3所述具有抗肿瘤活性的香菇发酵粗蛋白制剂，其特征在于是口服胶囊，由香菇发酵粗蛋白冻干原粉100g，低聚糖或乳糖400～600g，硬脂酸钙或硬脂酸镁10～30g，经充分混捏、混合均匀后分装口服用胶囊，每胶囊含香菇粗蛋白冻干原粉0.1～0.5mg.。

5、根据权利要求3所述具有抗肿瘤活性的香菇发酵粗蛋白制剂，其特征在于是速溶颗粒，由香菇发酵粗蛋白冻干原粉100g，低聚糖或乳糖100～300g，糊精300～1000g，混合均匀后造粒、装袋，每袋含香菇粗蛋白冻干原粉0.1～0.5mg。

6、根据权利要求3所述具有抗肿瘤活性的香菇发酵粗蛋白制剂，其特征在于是片剂，，由香菇发酵粗蛋白冻干原粉100g，淀粉10000g，硬脂酸钙或硬脂酸镁10～30g，低聚糖或乳糖400～600g，混合均匀后压片，每片含香菇粗蛋白冻干原粉0.1～0.5mg。

7、根据权利要求3所述具有抗肿瘤活性的香菇发酵粗蛋白制剂，其特征在于是口服液，由香菇发酵粗蛋白冻干原粉100g，吐温-802～5g，甘露醇5～10g，加无菌水搅拌稀释至香菇粗蛋白含量为0.1～0.5mg/ml。