[发明专利]一种通用的整合型细胞永生化载体的制备方法无效
| 申请号： | 200810013643.4 | 申请日： | 2008-01-14 |
| 公开（公告）号： | CN101215577A | 公开（公告）日： | 2008-07-09 |
| 发明（设计）人： | 胡国斌;王丹;宋珊珊;王锡亮 | 申请（专利权）人： | 中国海洋大学 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/37;C12N7/01 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 266100山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 通用 整合 细胞 永生 载体 制备 方法 | ||
1.一种通用的整合型细胞永生化载体的制备方法，其步骤包括：(1)以猿猴病毒40基因组或携带有SV40大T抗原基因的质粒为模板，PCR扩增SV40T基因，SV40T基因序列如序列表中SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示；(2)通过DNA重组技术将SV40T基因定向插入逆转录病毒载体的多克隆位点，构建携带SV40T基因的重组逆转录病毒载体；(3)将步骤(2)得到的重组载体与包装质粒pVSV-G共转染GP-293细胞，培养48-72小时后收获含有重组病毒颗粒的细胞上清液。
2.按权利要求1所述的通用的整合型细胞永生化载体的制备方法，其特征在于所述步骤(1)、(2)中的SV40T基因序列的内部还可以包含如序列表中SEQ ID NO.3所示的SV40小T抗原基因序列；在此种情况下，SV40T基因序列如序列表中SEQ ID NO.2所示。
3.按权利要求1所述的通用的整合型细胞永生化载体的制备方法，其特征在于所述步骤(2)中的逆转录病毒载体为pLXRN、pLNHX、pLXSN、pLNCX、pLPCX、pLHCX、Retro-XTM Q Vector系列和MSCV Retroviral Vector系列中的任一逆转录病毒载体。
4.按权利要求1所述的通用的整合型细胞永生化载体的制备方法，其特征在于步骤(3)之后，还包括对所收获的含有重组病毒颗粒的细胞上清液进行超速离心而制备高滴度的病毒液。
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