[发明专利]外源内共生菌向烟粉虱水平转染的方法

权利要求书

1.一种外源内共生菌向烟粉虱水平转染的方法，包括外源内共生菌沃尔巴氏体的制备、烟粉虱伪蛹受体的制备、注射、注射后烟粉虱伪蛹受体的培养，其特征在于，烟粉虱伪蛹受体的制备具体步骤如下：

将双面胶一面贴在洁净的载玻片上，在双面胶的边缘切除1mm的胶纸，露出1mm的胶面；采集烟粉虱伪蛹并背部向上固定在该胶面上，即得烟粉虱伪蛹受体。

2.如权利要求1所述的外源内共生菌向烟粉虱水平转染的方法，其特征在于，所述外源内共生菌沃尔巴氏体的制备具体步骤如下：

将米蛾的卵利用SPG缓冲液漂洗4-8次；在灭菌管中，使用SPG缓冲液将米蛾的卵进行匀浆，300g离心5-10min，将上清液转移到干净的0.2mL灭菌管中，12000g离心10-20min，除去上清液，用SPG缓冲液将沉淀悬浮并在300g离心5min，取上清夜，即为纯化的内共生菌，将纯化的内共生菌在室温下保存备用。

3.如权利要求1所述的外源内共生菌向烟粉虱水平转染的方法，其特征在于，所述的注射步骤具体如下：

取直径小于20μm的针头；在IM 300注射仪上将制得的外源内共生菌沃尔巴氏体分别注射入制得的烟粉虱伪蛹受体内，得水平转染后的烟粉虱伪蛹。

4.如权利要求1所述的外源内共生菌向烟粉虱水平转染的方法，其特征在于，所述注射后烟粉虱伪蛹受体的培养的具体步骤如下：

将水平转染后的烟粉虱伪蛹放于恒温27℃、湿度(RH)60％-80％的气候培养箱中；培养24小时，然后采集羽化成虫。

5.如权利要求2所述的外源内共生菌向烟粉虱水平转染的方法，其特征在于，外源内共生菌沃尔巴氏体的制备步骤中，所述的室温保存时间为0-5小时。