[发明专利]线粒体测序用26对PCR引物及基于该引物的分型方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种核酸检测方法，特别是一种线粒体全部碱基序列分型及其测定方法，，具体而言是线粒体测序用26对PCR引物及基于该引物的分型方法。

背景技术

线粒体(mtDNA)碱基分型，目前最常用的是应用多聚酶链式反应(PCR)扩增出需要的DNA片断，将扩增产物进行直接测序，并根据片段的碱基序列与线粒体标准序列进行比对得到结果。对于PCR产物的直接测序可用PAGE结合银染，以及荧光标记序列仪自动分析系统。对线粒体的研究在国内还集中于线粒体特定高变区，目前国际上线粒体已完成了全部碱基序列测定并予以公布，但在生物医学研究及法医学应用实践中存在以下问题：

(1)已有的线粒体碱基序列测定方法没有统一的方案，需要人为选择。

(2)这些线粒体碱基序列都是基于中国群体以外的群体(主要是白人群体)测定而获得的资料，其中有些基因位点，在中国群体的基因频率分布较差，并不能反映出中国群体的线粒体序列特点。

(3)国外公布的线粒体测定方法仍在改进，不同实验室之间无法达到结果的标准化。

上述缺点限制了线粒体遗传标记在国内的应用，不利于进一步在基层推广。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，提供适合中国群体的线粒体测序用PCR引物，以及基于所述线粒体测序用PCR引物的分型方法，该方法方便进行中国群体遗传学及法医学应用研究。

线粒体是人类第二套基因组，mtDNA具有严格的母系遗传特点，线粒体DNA的突变率高于核DNA的5～10倍，因此，线粒体DNA与核DNA序列相比，可以在较短进化时期内积累更多的核苷酸变化的信息，在追踪民族起源方面有着其它遗传标记无法比拟的优势，为现代人类的起源、人类迁移规律和进化提供了大量的证据。另外，线粒体DNA全序列仅一万多个碱基，其多态性集中体现在D-环区，仅1100多个碱基，DNA序列测定较为简便，成为法医检案中一种新的检测手段。在法医学个体识别中，通过mtDNA序列分析可实现一定程度的认定作用，尤其在特定人群的个体识别中(空难、遗骸的鉴定)发挥重要作用。

本发明提供了一种线粒体测序用26对PCR引物，选用的26对PCR引物覆盖了线粒体基因组全长(表1)，其中引物15-1、15-2、15-3、24-1、24-2针对中国人群重新设计，对中国人群的分型具有针对性；引物24-1对应的扩增片段最小，为420bp；引物22对应的扩增片段最大，为1162bp；所有PCR片段大小适中，均适宜PCR扩增。

表1  PCR引物序列