[发明专利]一种耐高温L－阿拉伯糖异构酶及其基因序列

权利要求书

1.一种来源于嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)IAM11001的耐高温L-阿拉伯糖异构酶，其基因核苷酸序列为SEQ ID NO：1。

2.如权利要求1所述的耐高温L-阿拉伯糖异构酶，其氨基酸序列为SEQ IDNO：2。

3.如权利要求1所述的耐高温L-阿拉伯糖异构酶的表达方法，其特征是：

(1)构建含有耐高温L-阿拉伯糖异构酶基因的表达质粒：

取嗜热脂肪芽孢杆菌IAM11001总DNA溶液3μL作为模版，以包含BamHI和XhoI的酶切位点的下列核苷酸序列作为引物，经PCR扩增得到所要的DNA片段；

引物1：5’-TGATGGATCCCATGCTGTCATTACGTCCT-3’

引物2：5’-TATATACTCGAGTTACCGCCCCCGCCAGAATAC-3’

PCR反应条件为：94℃5min，一个循环；94℃60s，56℃60s，72℃90s，三十五个循环；最后72℃延伸10min；

回收PCR产物，经限制性内切酶BamHI和XhoI进行双酶切，与经过同样双酶切的质粒pET-22b(+)，在T4连接酶的作用下进行连接，得到重组质粒pET-22b(+)-araA；

(2)将该重组质粒转化至宿主细胞中：将重组质粒pET-22b(+)-araA转化至感受态大肠杆菌BL21中，涂布含有50μg/mL氨苄抗生素的LB固体培养基上，37℃培养18-24h得到初步阳性克隆；

(3)经抗性培养基筛选得到阳性克隆：分别挑取初步阳性克隆于5mL含有50μg/mL氨苄抗生素的LB液体培养基中，37℃，200rpm培养过夜，提取质粒，经限制性内切酶BamHI和XhoI酶切质粒，根据电泳结果判断具有序列表SEQ ID NO：1的DNA片段的质粒为重组质粒pET-22b(+)-araA，具有该质粒的菌落为阳性克隆，命名为工程菌BL21-AI；

对重组质粒pET-22b(+)-araA进行测序，结果表明插入片段为一个含有1491bp，编码一个由496个氨基酸组成的蛋白质。