[发明专利]一种同时检测赭曲霉毒素A和黄曲霉毒素B1的试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

一种同时检测赭曲霉毒素A和黄曲霉毒素B₁的试剂盒及其检测方法，属于时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术领域，用于对粮食、饲料及食品中赭曲霉毒素A(OTA)和黄曲霉毒素B₁(AFB₁)含量的检测。

背景技术

赭曲霉毒素A(OTA)是真菌曲霉ochraceous和几种Penicillium真菌产生的一种毒素。OTA已经被证明对动物及人的肾产生损害，也是一种致癌物质，霉菌毒素引起的中毒大多通过被霉菌污染的粮食，油料作物以及发酵食品等引起，而且霉菌毒素中毒往往表现为明显的地方性和季节性，临床表现较为复杂，有急性中毒、慢性中毒以及致癌、致畸和致突变等。OTA在大多数谷物中均可分离到，包括大麦、小麦、燕麦、玉米、咖啡豆等，以这些谷物作为饲料的家禽也会受到污染。

第56次FAO/WHO食品添加剂联合专家委员会(JECFA)会议对OTA进行了危险性评价，得出的结论是体内和体外试验显示OTA都具有遗传毒性，考虑到小麦、大麦和黑麦等谷物是摄入OTA主要的食物品种，决定制定这些食物中OTA的限量标准，会议认为这些食物及其制品中OTA限量为5μg/kg。到目前为止，已有11个国家制定了食品(1-50μg/kg)和饲料(100-1000μg/kg)中的OTA的限量标准。

黄曲霉毒素B₁(AFB₁)是真菌黄曲霉Hspergillus flavus和寄生曲霉A.parasilicus菌株产生的一组强毒性的次生代谢产物，尤其是AFB₁为强污染物质，分布范围广，能引起人类，各种饲料动物的急性中毒死亡，还能引起致癌，致畸，致突变，即使几十μg/kg的含量仍有很大的毒性。食品和饲料中黄曲霉毒素1mg/kg以上有剧毒。其毒性为氯化钾的10倍，为砒霜的68倍。食用被黄曲霉毒素污染严重的食品后可出现发热，腹痛，呕吐，食欲减退，严重者在2～3周内出现肝脾肿大，肝区疼痛，皮肤黏膜黄染，腹水，下肢浮肿及肝功能异常等中毒性肝病症状，也可能出现心脏扩大，肺水肿，甚至痉挛，昏迷等症。由于不易防止食物被真菌污染，因此人们对长期食用低剂量黄曲霉毒素污染的可能性非常关注。由于黄曲霉毒素特别是B₁是潜在的致癌物质，人们长期接触低剂量的黄曲霉毒素可能会有影响，1988年国际癌症研究机构将黄曲霉毒素B₁列为1A类致癌物质。

黄曲霉毒素B₁是最强的致癌物质，它在食物中的法定限量非常低，其限量标准为2μg/kg。欧盟委员会对婴幼儿食品中的毒素限量标准进行了补充。草案规定，在包括谷类食品在内的婴幼儿食品中，毒性最大的黄曲霉毒素B₁的最大限量为0.05μg/kg。

鉴于AFB₁和OTA的危害，非常需要建立灵敏度高、测量范围宽、方便快捷的AFB₁和OTA等生物毒素的测定方法。由于在谷物等的安全性检测中，AFB₁和OTA经常是必须同时检测的项目，在同次操作中进行高灵敏的OTA和AFB₁的同步检测可以提高工作效率，降低应用成本。

目前OTA和AFB₁的测定方法有多种，如：薄层色谱法TLC，高效液相色谱法HPLC，免疫荧光染色法，但存在操作费时，仪器设备昂贵，操作复杂且不适用于大批量样品的检测等缺点。免疫测定法，由于其特异性强，灵敏度高，操作简便，不需直接接触毒素，且特别适于大批量样品的检测等优点而越来越被人们所重视和采用。尽管如此，常用的酶联免疫测定法检测的灵敏度和试剂的稳定性还不甚满意，而且无法同时进行OTA和AFB₁测定。