[发明专利]具有耐热特性的屎肠球菌Grx28及其制备方法、用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是从云南民族传统乳制品中分离获得具有良好耐热特性的屎肠球菌分离株，及应用。

技术背景

乳酸菌是一类可发酵碳水化合物，且主要生成乳酸的细菌的总称。乳酸菌在工业、农业、食品及医疗保健等与人类密切相关的领域中有很高的应用价值，现已被广泛应用于食品加工、医药保健、饲料发酵及畜禽疾病防治等许多领域中。

在发酵剂的制备，发酵食品如干酪、活性乳酸菌饮料，以及乳酸菌活菌制剂的生产等方面，都需要产品在加工后保持较高的活菌数量。很多研究工作致力于提高其中乳酸菌的数量，或者添加特殊营养成分、高效抗逆保护剂等做为减少乳酸菌死亡的方法。但最根本的是它们的生产需要可以承受一般加工条件的乳酸菌，只有在生产加工的处理过程中控制乳酸菌损失，才能在储存中得以保持乳酸菌的活力和活菌数量，以期在进入消费环节的时候仍有一定数量的活菌，因此具有一定耐受能力的乳酸菌的筛选、驯化成为食品微生物研究的重要方面。

发明内容

本发明第一目的在于提供一种具有耐热能力的乳酸菌。

即屎肠球菌Grx28，于2008年6月24日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，地址：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，保藏号CGMCC NO：2555。

经试验证明，屎肠球菌Grx28具有高温耐受力，在60℃/10min的处理条件下，活菌数量从热处理前的8.4×10⁸cfu/mL仅下降到处理后的2.4×10⁷cfu/mL，在65℃/5min的处理条件下，下降到处理后的2.1×10⁵cfu/mL。

本发明的第二目的在于提供上述屎肠球菌Grx28的制备方法：

包括以下步骤：

1、从云南大理或邓川地区的传统乳制品中分离出乳酸菌；

2、筛选具有耐受60℃/10min或65℃/5min热处理能力的乳酸菌，即为屎肠球菌Grx28。

本方法简单、易于操作，制取率高，筛选出具有优异的耐热能力的安全乳酸菌，再通过细菌形态学、生理学和培养特征，并通过法国梅埃里公司API系列鉴定试剂条和16SrRNA进行分析鉴定。结果证实了本发明的菌株是新颖的屎肠球菌菌株。

本发明的第三目的在于发明屎肠球菌Grx28的用途：

可用于制作乳扇。乳扇成品中活菌数达到5.2×10⁶cfu/g，比用传统酸浆生产的产品活菌数高100倍。

也可用于制作活性乳酸菌饮料。产品可适于常温销售，保质期达到15-30天。

还可用于制作酸乳粉。由于本发明菌株具有良好的耐热特性，因此生产的产品活性乳酸菌数量是普通乳酸菌的100倍以上。

用于制作其它发酵食品也是一种良好的选择。

附图说明

图1为屎肠球菌Grx28基因组DNA的荧光照片图。

图2屎肠球菌Grx28的16S rDNA-PCR产物的荧光照片图。

具体实施方式

本发明的屎肠球菌Grx28已于2008年6月24日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，地址：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，保藏号CGMCC NO：2555。

下述实施例阐述了本发明的实践和目前优选的实施方式。

1、样品的来源和采集

云南适宜多种微生物生长，乳酸菌资源丰富，且乳酸菌的生物学特性得到了很好的保存。云南牧区长年居住着以放牧为主的牧民，他们沿用传统方式生产的风味独特的具有民族特色的传统发酵乳制品，营养丰富，具有良好的感官与功能特性。由于千百年来传统乳制品均由手工制作，使得传统乳制品中的许多优良性状的乳酸菌得以存在且生物学特性得到了很好的保存。

本发明乳酸菌来源于云南大理民族乳制品——乳扇。乳扇是我国云南极富特色的传统乳制品之一，是一种用牛乳加入采用乳酸菌天然发酵酸浆制作的酸凝拉伸型干酪。乳扇样品分别采集于中国云南大理白族自治州洱源地区。样品存放于灭菌采样瓶中，置于4℃条件下保存。

2、从乳扇中分离出乳酸菌

取1.0g固体样品，无菌粉碎，置于无菌水中，充分混合，各取1mL分别接种于表1的培养基，按照培养基和培养条件的组合方式富集培养。

将采集于云南大理民族乳制品乳扇样品在M17液体培养基中，42℃培养24小时富集。将该培养物涂布在M17琼脂平板上，然后在42℃培养48小时。培养后，收集在琼脂培养基上出现的菌落，并进一步纯化，淘汰非乳酸菌菌株。