[发明专利]家蚕丝腺生物工厂的建立方法及其制药用途

权利要求书

1.一种构建家蚕丝腺生物工厂的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)构建带有家蚕丝腺特异性表达基因的启动子X控制外源蛋白基因表达盒；

(2)构建带有增强子元件en的基于piggyBAC转座子的带有荧光蛋白报告基因的载体pigA3-en；

(3)双酶切步骤(1)所得载体，回收启动子X控制外源基因的片段，克隆进同样双酶切的pigA3-en，得带有增强子en和启动子X控制外源基因的载体；

(4)构建昆虫细胞内具有活性的启动子Y控制抗生素抗性基因的重组载体；

(5)酶切步骤(4)所得载体，回收启动子Y控制抗性基因的片段，克隆进同样酶切的步骤(3)所得载体，得到带有荧光蛋白报告基因和启动子X控制外源基因表达盒、增强子元件、启动子Y控制抗生素抗性基因的重组转基因载体；

(6)步骤(5)所得重组转基因载体，在辅助质粒的作用下，利用精子介导法导入初产卵，孵化，筛选获得带有抗生素抗性基因、荧光蛋白报告基因的家蚕，检测到目的基因，育种制成转基因家蚕。

2.根据权利要求1所述的构建家蚕丝腺生物工厂的方法，其特征在于：所述家蚕丝腺特异性表达基因启动子X选自丝素蛋白重链基因启动子、丝素蛋白轻链基因启动子、丝胶蛋白-1基因启动子或P25基因启动子中的一种；昆虫细胞内具有活性的启动子Y为家蚕核型多角体病毒IE-1基因启动子。

3.根据权利要求1所述的构建家蚕丝腺生物工厂的方法，其特征在于：所述外源蛋白基因是药用蛋白基因，选自人胰岛素样生长因子-I基因、人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因中的一种。

4.根据权利要求1所述的构建家蚕丝腺生物工厂的方法，其特征在于：所述的增强子en选自家蚕丝素蛋白轻链基因第一内含子序列、杆状病毒的同源区增强子序列中的一种。

5.根据权利要求1所述的构建家蚕丝腺生物工厂的方法，其特征在于：所述的抗性基因选自新霉素抗性基因neo抗性基因。

6.一种含有外源蛋白的药物制备方法，其特征在于：采用权利要求1获得的转基因家蚕的丝腺经冷冻干燥后制成药物。

7.一种含有外源蛋白的药物制备方法，其特征在于：采用权利要求1获得的转基因家蚕进行蚕种繁殖，将获得的家蚕的丝腺经冷冻干燥后制成药物。