[发明专利]脓毒症早期诊断液相芯片及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学体外诊断技术，具体的是涉及脓毒症早期诊断液相芯片及其制备方法。

背景技术

脓毒症(Sepsis)是严重感染、严重创(烧)伤、休克、外科手术后常见的并发症，是由 于微生物(如细菌、病毒、真菌、寄生虫等)侵入人体而诱发的激烈全身炎症反应，并对组织 具有损伤性的病理生理过程的一组临床表现。严重脓毒症可以导致脓毒性休克、多器官功能 障碍(MODS)，对人类健康和经济发展构成极大的威胁和挑战，已成为非心脏病死亡的主要 原因。

当前，脓毒症存在着患病率高、病死率高、治疗费用高的三高现象。据统计，脓毒症的 患病率约为总人口的0.3％，全球每年发生的总病例数约1800万例，相当于丹麦、芬兰、爱 尔兰和挪威人口的总和，仅美国每年患病人数就有75万例。中国虽然没有确切的统计数据， 但推算应该不低于每年400万例。不仅如此，资料还显示脓毒症病例数正以每年1.5％的比例 增长，预计到2050年，美国人口增加约30％(达到4亿)，但脓毒症病例数将增加1倍以上 (达到160万例)。脓毒症的病死率约为28％～50％，平均40％，中国国内不完整的报告数 据与此相近，全世界死亡人数每天超过1.4万例，美国每年达到21.5万例，尚有相当的死亡 病例没有计算在内而归咎于原发病。脓毒症已经对人类健康产生严重威胁，为经济发展带来 巨大负担。在美国，每例患者的平均治疗费用约为2.2万美元，年耗资近200亿美元，欧洲 年耗资近100亿美元。我国没有这方面的确切数据，凭经验估计每例患者的平均治疗费用不 会低于美国，因此治疗总耗资相当可观。

准确及时诊断早期脓毒症、指导脓毒症的治疗和判断预后是目前ICU(重症监护病房) 所面临的一个棘手难题。尽管现代医疗技术和重症监护水平明显提高，但严重脓毒症、脓毒 性休克或多器官功能障碍综合征(MODS)等并发症的病死率仍高达50％～70％。目前临床上 对严重脓毒症或MODS尚缺乏切实有效的预警指标和监测方法。由于危重病人全身性炎症反 应，感染与非感染临床表现相互混淆，脓毒症的传统诊断指标如体温(TEMP)、白细胞计数 (WBC)、血沉(ESR)、C-反应蛋白(CRP)等都是非特异性的，且可靠性不强。

现有的实验诊断方法包括早期病原体诊断和血清学指标检测。早期病原体运用细菌 16srRNA基因扩增的方法检测细菌，从而判断细菌的存在与否及常见细菌的种类。这种技术 具有快速、灵敏度高、不受抗生素治疗影响等优点。其不足之处是会出现假阳性，且目前价 格较昂贵。血清学指标检测目前常用的标志物有降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、白细 胞介素-6(IL-6)及新喋呤等。一些欧洲国家用PCT作为鉴别系统性炎症反应综合症(SIRS) 和脓毒症的一个指标，并且有相关的商用试剂产品销售，但也有人对该指标持有异议，认为 其过于敏感。CRP也被作为诊断及监测脓毒症的一个参数。遗憾的是单一标志物始终存在着 特异性不强，阳性率较低等不足，只能作为脓毒症诊断和监测的参考，不能作为诊断脓毒症 的真正的特异性指标。

PCT特异性好，化学性能稳定，在早期预测脓毒症及其预后有较大潜力，但其敏感性稍 差，配合敏感性好的新喋呤和C反应蛋白，可进一步提高其预测效率。脓毒症时IL-6的升高 比这些急性期蛋白升高出现得更早。联合检测这些指标可以提高检测的灵敏度和准确度，可 以用来对脓毒症进行早期诊断和判断预后。

本发明根据大量文献资料，确定联合应用降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、白介素 -6(IL-6)和新喋呤这四项指标来综合评估脓毒症及其预后，进而及时地进行早期干预，防止 脓毒症的进一步恶化和改善患者预后。

(1)C反应蛋白(CRP)：CRP于1930年在肺炎病人血清中发现，可以与肺炎球菌的多聚糖片 断C发生反应并沉淀。正常人群CRP水平在10mg/L以下，脓毒症患者CRP在感染发生后4～6h 即开始升高，36～50h达到高峰，峰值可达正常参考值的数百倍，感染消除后其含量急骤下降， 1周内可恢复至正常。CRP在病毒感染时无显著升高，可以用来区别感染性炎症和其他类型的 炎症，检测敏感性为92.1％，特异性为82.1％。CRP在疾病整个过程中浓度分布超过下常值， 但与病情严重程度无关。