[发明专利]一种人狂犬病免疫球蛋白的生产方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种含高效价狂犬病抗毒素人免疫球蛋白的生产方法。

背景技术：

狂犬病是一种古老而又缺乏有效药物治疗的一种人畜共患的全球流行性传染性疾病。世界卫生组织统计，全球三分之二以上的国家和地区有狂犬病流行，非流行期每年约5万以上人死于狂犬病。我国及东南亚地区处于世界狂犬病高发区，其病例数约占全球的70％以上。狂犬病一旦发病目前尚无法医治，死亡率100％，由于传染源的广泛存在，流行面广、无季节性、感染后潜伏期长给狂犬病的防治带来较大困难。

根据WHO推荐的狂犬病免疫接种方案，对暴露者尽可能多在伤口周围按20Iu/kg体重浸润性注射人狂犬病免疫球蛋白(HRIG)，然后肌肉注射狂犬病疫苗，以确保暴露者免疫效果。该方法被世界卫生组织及世界各国医务人员公认为目前唯一有效的预防方法。人狂犬病免疫球蛋白能中和狂犬病毒，提高机体的狂犬抗体水平，在狂犬病的早期预防上起到了重要作用。对暴露者肌肉注射适当剂量的人狂犬病免疫球蛋白，不仅能迅速提高患者的抗体水平，增强被动免疫效果，同时也能够提高免疫机能低下者如年老体弱及儿童患者的治疗存活率。

使用人狂犬病免疫球蛋白的临床意义主要体现在三方面：注射抗狂犬免疫球蛋白可使机体处于高抗体状态，封闭敏感细胞，减少和抑制病毒的扩散速度；狂犬病潜伏期短至6天，疫苗接种后自身抗体产生时间一般为15天才能达到保护水平，抗狂犬免疫球蛋白能弥补这一时间的体内抗体含量缺乏的空间；马血清狂犬病免疫球蛋白严重的异种蛋白过敏反应及血清病导致临床使用受到限，人狂犬免疫球蛋白基本上无过敏现象，为临床推广建立了较好的基础。

采用高效价人狂犬病免疫球蛋白治疗狂犬病，经肌肉注射即可迅速提高患者体内抗体水平，避免静脉输液所引起的不良反应，消除药物使用的不安全因素，方便给药，而且产品提取自人血浆中，对患者没有致过敏作用，因此使用安全。

从人血浆中分离免疫球蛋白，经典方法是E.J.Cohn教授创立的低温乙醇分级沉淀技术，该技术通过有效控制蛋白质沉淀的五个因素：pH值、温度、蛋白浓度、离子强度、乙醇浓度来逐级沉淀血浆中的不同蛋白质。

在低温乙醇法分离血浆蛋白中，蛋白质沉淀的分离传统方法采用连续冷冻离心机分离工艺，该工艺要求操作温度保持低温，对能源消耗大而且对操作员身体健康不利，该工艺是歇式操作，期间容易发生操作人员和制品的直接接触导致污染，影响制品的抗体效价和产品质量。

发明内容

本发明的目的在于弥补现有技术的不足，提供一种有别于传统的人狂犬病免疫球蛋白的生产方法，既能有效分离免疫球蛋白，又能保持蛋白中的高效价狂犬病抗体。

根据上述发明目的，本发明采用了以下技术方案：

(A)血浆采集；

(B)组分123的制备：血浆融化混匀后调节到pH7.0～7.4，温度-2～-3℃、酒精浓度8％，蛋白浓度5.1％、离子强度0.15，搅拌反应30分钟，静置2h；

调整溶液的参数：pH6.8～6.9，温度-4～-5℃、酒精浓度20％，蛋白浓度4.3％、离子强度0.14，搅拌反应30分钟以上，静置8h；

添加助滤剂，压滤，泵入洗液1循环冲洗，用压缩空气吹干到无上清液流出，得沉淀组分123；

(C)组分3的制备：组分123加冷蒸馏水溶解，

调整参数：pH5.1～5.2，温度-4～-5℃、酒精浓度18％、离子强度0.15，搅拌反应30min以上，静置8h；

压滤，滤完后用压缩空气吹干，所得沉淀即组分3，上清液用于分离组分2；

(D)组分2的制备：调节步骤C中所得上清液的参数：pH7.3～7.5，温度-9～-10℃、酒精浓度25％、离子强度0.05，搅拌反应30min以上，静置8h；

压滤，滤完用压缩空气吹干到无上清液流出，所得沉淀即组分2；

(E)组分2的溶解及超滤浓缩：

调节参数：pH5.1～5.2，温度3～7℃，搅拌反应30min以上，静置4h；超滤浓缩；

(F)病毒灭活：灭活罐内蛋白液浓度控制在4.5～5.0％，加入山梨醇保护剂，调节pH5.0，在59.5～60.5℃温度下灭活8.5～10.5小时；

(G)配液及分装：蛋白液浓度调整至18％以下，狂犬病抗体效价控制在110IU/ml，pH6.55～6.65，经除菌滤膜过滤分装。