[发明专利]同时分析烟草及其制品20种氨基酸的方法

权利要求书

1.一种同时分析烟草及其制品20种氨基酸的方法，其特征在于 采用液相色谱和电喷雾串联质谱联用，包括以下步骤：

(1)烟草样品经前处理得到提取液；

(2)提取液在反相色谱柱上以二元流动相梯度洗脱；

(3)制作两种不同浓度系列的标准曲线，采用液相色谱-电喷雾 离子阱串联质谱在正离子模式下进行烟草中20种氨基酸的分析检 测；

其中，步骤(1)所述前处理包括采用含正缬氨酸作为内标的HCl 溶液为萃取溶液，在超声震荡下萃取烟末；将萃取液过滤；所述HCl 溶液浓度为0.03M；

步骤(2)所述反相色谱柱为HyPURITY C₁₈；柱箱温度为25℃；

所述二元流动相为A：99％水-1％乙腈-0.1％九氟戊酸和B：10％ 水-90％乙腈-0.1％九氟戊酸；所述流动相梯度为：

步骤(3)所述的电喷雾离子阱串联质谱的测定条件为：氮气压 力：0.64MPa；氦气压力：0.38MPa；极性：正电离；扫描形式：全 扫描；采集时间：40min；激活时间：30ms；吹扫气：0LTQ单位； 喷雾电压：5kV；毛细管温度：350℃；扫描范围：标准；扫描速率： 标准；分段检测；所述分段是分为4段，其中第3分段的鞘气和辅助 气分别为38LTQ单位和0LTQ单位，其余分段的鞘气和辅助气分别 为46LTQ单位和19LTQ单位；

步骤(3)所述制作两种不同浓度系列的标准曲线是：

(a)配制含内标正缬氨酸浓度为1.7μM的氨基酸混和标准溶液 I，其中天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酰胺、苏氨酸、谷氨酸、胱氨酸、 γ-氨基丁酸、哌啶酸、缬氨酸、甲硫氨基酸、组氨酸、酪氨酸、赖氨 酸、异亮氨酸、精氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和色氨酸的浓度均为50μM 的0.03M HCl溶液；

(b)配制含内标正缬氨酸浓度为1.7μM的氨基酸混和标准溶液 II，其中脯氨酸和天冬酰胺的浓度分别为500μM的0.03M HCl溶液；

(c)用含正缬氨酸浓度为1.7μM的0.03M HCl把标准溶液I和 标准溶液II配成系列浓度，制作标准曲线。

2.根据权利要求1所述同时分析烟草及其制品20种氨基酸的方 法，其特征在于所述萃取烟末与萃取溶液的比例为0.1～0.2g∶20ml； 萃取时间为15min。

3.根据权利要求1所述同时分析烟草及其制品20种氨基酸的方 法，其特征在于所述过滤是采用0.2μm滤膜过滤。