[发明专利]同时分析烟草及其制品20种氨基酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及化学分析检测技术领域，具体涉及一种同时分析烟草及其制品20种氨基酸的方法。 

背景技术

氨基酸是烟叶中的重要组成部分，是与烟气香味、卷烟品质和品牌特征密切相关的烟草成分，氨基酸参与烟叶中的非酶棕色反应，即美拉德反应，此反应可产生多种重要的致香成分。因此，测定烟草中的氨基酸对配方研制、工艺生产和品质控制都有十分重要的意义。 

由于烟草中的氨基酸种类较多，且具有酸性、中性和碱性三种不同的化学性质，加上烟草基质复杂，因此对烟草中多种氨基酸的同时测定具有一定难度。目前，液相色谱(LC)法是较多使用的氨基酸测定方法之一。由于氨基酸不具有紫外和荧光检测所需的发色基团，若用液相色谱法进行检测，则必须对氨基酸进行柱前或柱后衍生。衍生化操作步骤繁琐，耗时耗力，而且衍生化合物的稳定性难以直观的评判，某些氨基酸衍生反应的完全程度也难以保证，同时衍生反应还可能生成非目标衍生物，这些都会影响氨基酸的准确测定。自动氨基酸分析仪也存同样的衍生问题。 

烟草成分相当复杂，用LC、自动氨基酸分析仪、离子色谱(IC)和毛细管电泳(CE)等方法进行氨基酸分析往往需要对样品进行固相萃取等繁杂的前处理，以减少干扰。现有的固相萃取等前处理会在一 定程度上造成某些氨基酸(或氨基酸衍生物)的损失，而且有些干扰杂质也难以通过前处理消除。 

近年来，随着电喷雾离子化(ESI)和串联质谱(MS/MS)技术的发展，液相色谱和电喷雾串联质谱联用(LC-ESI-MS/MS)在复杂化合物分析中得到广泛的应用。LC-MS/MS方法的灵敏度高，选择性优异。由于MS/MS具有特征离子提取功能，与色谱方法相比，对待测物的色谱分离度要求并不难么严格。利用液相色谱与电喷雾离子阱串联质谱(LC-ESI-MS/MS)联用技术同时对烟草中20种非衍生化氨基酸的快速分析方法目前未见相关的技术报道。 

发明内容

本发明的目的是克服现有技术不足，提供一种同时分析烟草及其制品20种氨基酸的方法。 

本发明的目的通过以下技术方案来予以实现： 

提供一种同时分析烟草及其制品20种氨基酸的方法，采用液相色谱和电喷雾串联质谱联用，包括以下步骤： 

(1)烟草样品经前处理得到提取液； 

(2)提取液在反相色谱柱上以二相流动相梯度洗脱； 

(3)制作两种不同浓度系列的标准曲线，采用液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱在正离子模式下进行烟草中20种氨基酸的分析检测。 

步骤(1)所述前处理包括采用含正缬氨酸浓度为1.7μM的HCl溶液为萃取溶液，在超声震荡下萃取烟末；萃取液过滤。所述HCl溶 液浓度为0.03～0.1M，优选浓度为0.03M。 

所述萃取烟末与萃取溶液的比例为0.1～0.2g∶20ml；萃取时间为15min；所述过滤是采用0.2μm滤膜过滤。 

步骤(2)所述反相色谱柱为HyPURITY C₁₈；所述二元流动相为99％水-1％乙腈-0.1％九氟戊酸和10％水-90％乙腈-0.1％九氟戊酸。 

步骤(3)所述制作两种浓度系列的标准曲线是： 

(1)配制含内标正缬氨酸浓度为1.7μM的氨基酸混和标准溶液I，其中天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酰胺、苏氨酸、谷氨酸、胱氨酸、γ-氨基丁酸、哌啶酸、缬氨酸、甲硫氨基酸、组氨酸、酪氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、精氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和色氨酸的浓度均为50μM的0.03M HCl溶液； 

(2)配制含内标正缬氨酸浓度为1.7μM的氨基酸混和标准溶液II，其中脯氨酸和天冬酰胺的浓度分别为500μM的0.03M HCl溶液； 

(3)用含正缬氨酸浓度为1.7μM的0.03M HCl把标准溶液I和标准溶液II配成系列浓度，制作标准曲线。 

步骤(3)所述液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱的测定条件为：氮气压力：0.64MPa；氦气压力：0.38MPa；极性：正电离；扫描形式：全扫描；采集时间：40min；激活时间：30ms；吹扫气：0LTQ单位；喷雾电压：5kV；毛细管温度：350℃；扫描范围：标准；扫描速率：标准；分段。所述分段是分为4段，其中第3分段的鞘气和辅助气分别为38LTQ单位和0LTQ单位，其余分段的鞘气和辅助气分别为46LTQ单位和19LTQ单位。 

本发明的有益效果是：