[发明专利]一种降解纤维素合成乙醇的转基因酿酒酵母菌及其构建方法

权利要求书

1、一种降解纤维素合成乙醇的转基因酿酒酵母菌，其特征在于该转基因酿酒酵母菌是将纤维素酶系的内切β-1，4-葡聚糖酶、外切β-1，4-葡聚糖酶和纤维二糖酶三种酶的基因通过酿酒酵母表达载体共同转入酿酒酵母菌，构建而得。

2、根据权利要求1所述的转基因酿酒酵母菌，其特征在于所述酿酒酵母表达载体为酿酒酵母多基因表达载体。

3、一种权利要求1所述的转基因酿酒酵母菌的构建方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)将内切β-1，4-葡聚糖酶基因、外切β-1，4-葡聚糖酶基因和纤维二糖酶基因接入酿酒酵母表达载体中，构建重组质粒；

(2)将上述构建得到的重组质粒用限制性内切酶切割，使之线性化后转化到酿酒酵母菌中，构建转基因酿酒酵母菌。

4、根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于步骤(1)构建重组质粒包括：

a.含有内切β-1，4-葡聚糖酶基因的DNA片段的PCR扩增；

b.含有外切β-1，4-葡聚糖酶基因的DNA片段的PCR扩增；

c.含有纤维二糖酶基因的DNA片段的PCR扩增；

d.用限制性内切酶分别切割载体、内切β-1，4-葡聚糖酶基因、外切β-1，4-葡聚糖酶基因和纤维二糖酶基因；

e.将内切β-1，4-葡聚糖酶基因、外切β-1，4-葡聚糖酶基因和纤维二糖酶基因接入酿酒酵母表达载体中。

5、根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于步骤(2)中所述限制性内切酶为Apa I。

6、根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于步骤(2)中所述转化方法为电转法、冷冻法、化学试剂法。

7、根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于所述内切β-1，4-葡聚糖酶基因为木霉的内切β-1，4-葡聚糖酶基因eg3；所述外切β-1，4-葡聚糖酶基因为木霉的外切β-1，4-葡聚糖酶基因cbh2；所述纤维二糖酶基因为木霉的纤维二糖酶基因bgl1。

8、根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于所述限制性内切酶为BamH I、SpeI、Nhe I、Xba I。