[发明专利]一种分支杆菌差异表达系统及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明属微生物和生物工程领域。具体涉及一种分支杆菌差异表达系统及其制备方法与应用。 

背景技术

结核病是全世界关注的一种主要的公众传染性疾病。早在1993年，世界卫生组织(WHO)就全球的结核病例日趋增多而宣布结核病疫情进入紧急状态。目前，全世界约有1/3人口(18.6亿)携带有结核杆菌，每年约有800万新增病例，200万人死于结核病；我国大约有活动性结核病人600万，每年有25万人死于结核病。根据卫生部公布的2005年传染病疫情，在27种法定甲、乙类传染病中，肺结核的发病数已经超过乙型肝炎，肺结核的死亡数超过了狂犬病，发病数和死亡数均居第一位。而且，结核病的控制也因为多重抗药性(Multidrug-resistant，MDR)菌株和艾滋病的出现使得本就越来越严重的结核病疫情变得更加复杂化。 

目前，预防结核病唯一有效的疫苗是卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin，BCG)，一种活的减毒牛型分支杆菌(Mycobacterium bovis)。然而遗憾的是由于BCG发明的当时还没有冻干技术，用来生产BCG的菌种在早期是通过培养的方法进行传代和保存的，这种方法一直沿用到20世纪60年代，结果造成了世界各国使用的卡介苗菌种之间极大的差异性。据统计，在世界各国进行过大小数十次的卡介苗临床试验，然而试验结果显示，卡介苗对肺结核的免疫保护力为0-80％，差异性极大(Brewer，T.F.and Colditz，G.A.Clin Infect Dis.1995；20：126-35.Colditz，G.A.，Brewer，T.F.，et al.JAMA.1994；271：698-702.)。因此，研究一种保护效力超过BCG的结核病新疫苗势在必行。 

尽管BCG对成人结核病的保护效力差强人意，但是由于其良好的免疫刺激效果以及数十年来业已证实的安全性，使得其可作为预防结核病以及其他传染病的优良细菌表达载体。有报道证实了不同来源的保护性候选抗原均可在其中克隆并得以表达，从而构建了相应更为高效的重组BCG疫苗(Stover，C.K.，de la Cruz， V.F.，et al.Nature.1991；351：456-60.Stover，C.K.，Bansal，G.P.，et al.J Exp Med.1993；178：197-209.Grode，L.，Seiler，P.，et al.J Clin Invest.2005；115：2472-9.)。几项致力于提高针对结核病、麻风病、利氏曼原虫感染的接种效率的研究表明，不同的抗原可能需要不同的表达水平才能诱导出机体最佳的免疫效果(Bloom，B.R.and Fine，P.E.M.in Tuberculosis：Pathogenesis，Protection and Control(Bloom，B.R.，Ed.)，1994；pp.531-7.ASM Press.Washington，DC.DasGupta，S.K.，Jain，S.，et al.Biochem Biophys Res Commun.1998；246：797-804.)。