[发明专利]CIDE-A基因CpG启动子序列及其应用

权利要求书

1.一种分离的核酸，其特征在于，所述的核酸序列选自下组：

(1)由SEQ ID NO：1中(1-1420)～1544位所示的核苷酸序列构成；

(2)具有SEQ ID NO：1中(1-1420)～1544位所示的核苷酸序列且具有指导目的基因转录或表达功能的核苷酸序列；

(3)在严格条件下能够与(1)或(2)限定的核苷酸序列杂交且具有指导目的基因转录或表达功能的核苷酸序列；

(4)与(1)或(2)限定的核苷酸序列有70％以上相同性且具有指导目的基因转录或表达功能的核苷酸序列；或

(5)与(1)-(4)任一限定的核苷酸序列互补的核苷酸序列。

2.如权利要求1所述的核酸，其特征在于，所述的核酸序列选自下组：

具有SEQ ID NO：1中1420～1544位序列；

具有SEQ ID NO：1中1361～1544位序列；

具有SEQ ID NO：1中1307～1544位序列；

具有SEQ ID NO：1中1119～1544位序列；

具有SEQ ID NO：1中917～1544位序列；

具有SEQ ID NO：1中665～1544位序列；

具有SEQ ID NO：1中444～1544位序列；或

具有SEQ ID NO：1中1～1544位序列。

3.一种载体，其特征在于，所述的载体含有权利要求1或2所述的核酸，作为启动子元件。

4.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，所述的细胞：

含有权利要求3所述的载体；或

其基因组中整合有外源的权利要求1或2所述的核酸。

5.一种检测待测核酸中细胞凋亡诱导DEF45样因子A基因启动子甲基化模式的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)应用使非甲基化胞嘧啶转化为尿嘧啶的试剂处理待测核酸；

(2)用细胞凋亡诱导DEF45样因子A基因启动子CpG岛的特异性引物从(1)的待测核酸中扩增细胞凋亡诱导DEF45样因子A基因启动子CpG岛；

(3)应用限制性内切酶HhaI来酶切(2)的扩增产物；

若所述扩增产物能够被HhaI酶切，则说明细胞凋亡诱导DEF45样因子A基因启动子为甲基化模式；

若所述扩增产物不能被HhaI酶切，则说明细胞凋亡诱导DEF45样因子A基因启动子为非甲基化模式。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的细胞凋亡诱导DEF45样因子A基因启动子CpG岛的特异性引物具有SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的序列。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，利用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR产物是否被酶切；

若产生约580bp的条带，则说明PCR产物未被HhaI酶切；

若产生约200bp和90bp的条带，则说明PCR产物被HhaI酶切。

8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的使非甲基化胞嘧啶转化为尿嘧啶的试剂是亚硫酸氢盐。

9.一种限制性内切酶HhaI的用途，其特征在于，用于制备检测细胞凋亡诱导DEF45样因子A基因启动子甲基化模式的试剂盒。

10.一种用于检测待测核酸中细胞凋亡诱导DEF45样因子A基因启动子甲基化模式的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有：

限制性内切酶HhaI；

特异性扩增细胞凋亡诱导DEF45样因子A基因启动子CpG岛的引物；和

使非甲基化胞嘧啶转化为尿嘧啶的试剂。