[发明专利]CIDE-A基因CpG启动子序列及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明涉及细胞凋亡诱导DEF45样因子A(CIDE-A)基因CpG启动子序列及其应用。

背景技术

DNA甲基化是一种表观遗传修饰，它是由DNA甲基转移酶(DNAmethyl-transferase，Dnmt)催化S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体，将胞嘧啶核苷酸的嘧啶环第5位碳原子甲基化，并与其3’端的鸟嘌呤形成甲基化的CpG(mCpG)，且在双链中对称出现。在真核生物DNA中，CG二核苷酸是最主要的甲基化位点，通常基因组70～90％的CpG序列发生这种甲基化修饰。在这样的序列中，胞嘧啶(C)与鸟嘌呤(G)的总和超过四种碱基总和的50％，这种富含CpG序列的DNA片段被称为CpG岛。人类约50％基因的5’端可发现CpG岛，CpG岛占总DNA的1％左右。

近年来，研究者不断探索定性及定量检测单个或多个甲基化位点的方法，但由于甲基化多态性区域存在的密度很高，所以对于延伸反应其引物的位置很难设计。

随着人们生活水平的提高和饮食结构的变化，肥胖病的发病率也有逐年增高的趋势，肥胖可增加患糖尿病、高血压和心血管疾病的危险。根据流行病学统计，肥胖发生率的增加与成年人群死亡率的增加呈高度相关，不论国内国外，肥胖病都已成为当前最广泛的严重威胁人类健康的疾病之一。现在研究已经发现在肥胖病人中存在一系列的基因表达失调的情况，而引起这种改变的重要机制之一就是基因启动子区域DNA甲基化修饰作用，该区域的DNA甲基化程度影响着基因的表达水平。CIDE-A是一类新发现的具有诱导细胞死亡作用的蛋白家族成员之一，在脂肪组织中存在特异性的高表达。CIDE-A可以诱导细胞凋亡，其凋亡诱导活性可以被DFF45抑制。鼠源CIDE-A可以与解偶联蛋白1(UCP1)相互作用，它可能是通过直接抑制UCP1的活性来调控脂肪水解、肥胖和热量产生。人的CIDE-A在肥胖人群中的表达水平要低于正常人群，而且受到TNF-α信号通路的负调，在脂肪的合成和代谢中发挥重要作用，提示CIDE-A基因的表达沉默或下调可能是肥胖发生的机制之一，也是一个潜在的治疗肥胖的作用靶点。

随着人们对DNA甲基化在疾病发生相关基因表达过程中所发挥的作用的日益重视，对各类疾病发生相关基因的DNA甲基化分析已成为当前疾病基因治疗研究的热点，而肥胖日益成为危及健康的重大疾病，因此本领域迫切要求研究相关发生基因的DNA甲基化状态，并在此基础上开发敏感有效的诊断与治疗的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种来源于细胞凋亡诱导DEF45样因子A(CIDE-A)启动子区域的启动子及其用途。

本发明的另一目的在于提供含有所述启动子的表达载体以及宿主细胞。

本发明的另一目的在于提供一种检测待测核酸中细胞凋亡诱导DEF45样因子A基因启动子甲基化模式的方法；以及检测试剂或检测试剂盒。

在本发明的第一方面，提供一种分离的核酸，所述的核酸序列选自下组：

(1)由SEQ ID NO：1中(1-1420)～1544位所示的核苷酸序列构成；

(2)具有SEQ ID NO：1中(1-1420)～1544位所示的核苷酸序列且具有指导目的基因(如细胞凋亡诱导DEF45样因子A，CIDE-A)转录或表达功能的核苷酸序列；

(3)在严格条件下能够与(1)或(2)限定的核苷酸序列杂交且具有指导目的基因转录或表达功能的核苷酸序列；

(4)与(1)或(2)限定的核苷酸序列有70％以上相同性且具有指导目的基因转录或表达功能的核苷酸序列；或

(5)与(1)-(4)任一限定的核苷酸序列互补的核苷酸序列。

在另一优选例中，所述的核酸序列选自下组：

具有SEQ ID NO：1中1420～1544位序列(对应于CIDE-A翻译起始位点上游-137/-13)；

具有SEQ ID NO：1中1361～1544位序列(对应于CIDE-A翻译起始位点上游-196/-13)；

具有SEQ ID NO：1中1307～1544位序列(对应于CIDE-A翻译起始位点上游-250/-13)；

具有SEQ ID NO：1中1119～1544位序列(对应于CIDE-A翻译起始位点上游-438/-13)；

具有SEQ ID NO：1中917～1544位序列(对应于CIDE-A翻译起始位点上游-640/-13)；