[发明专利]黄瓜霜霉病抗性主效QTL连锁的分子标记方法和应用方法

权利要求书

1、一种黄瓜霜霉病抗性主效QTL连锁的分子标记方法，是通过以下步骤获得：

a)得到黄瓜霜霉病抗病品种S94(♀)和黄瓜霜霉病感病品种S06(♂)和杂交，得到杂种F₁；

b)由杂种F₁自花授粉获得F₂子代，通过子代单粒传方法获得F₇代的重组自交系；

c)对重组自交系每个株系进行分子标记分析，并对重组自交系每个株系的基因型进行描述；具体方法：分离重组自交系每个株系的基因组DNA，采用相关序列扩增多态性、微卫星、序列特异性扩增区和序列标签位点分子标记引物进行PCR扩增，扩增产物在1.5％琼脂糖凝胶和6g/100ml聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离后，获得分子标记资料；

d)基于孟德尔和摩尔根遗传连锁和分离规律，用获得的分子标记资料构建遗传连锁图；

e)测定重组自交系每个株系的霜霉病抗性；

f)将重组自交系每个家系的霜霉病抗性与黄瓜遗传连锁图中的分子标记进行连锁和QTL分析，QTL分析采用WinCart QTL2.1进行，先进行测验，P＜0.005表明该标记与霜霉病抗性连锁，可能存在QTL，然后对可能存在QTL的区间进行复合区间作图，以2.5为LOD阈值，大于2.5说明存在一个QTL位点，从而确定与抗源S94霜霉病抗性主效QTL的分子标记E23m18d、CMBR40和CMBR97。

2、根据权利要求1所述的黄瓜霜霉病抗性主效QTL连锁的分子标记方法，其特征是，所述的黄瓜抗霜霉病品系S94是从中国北方长春密刺的后代变异株系从选择。

3、根据权利要求1所述的黄瓜霜霉病抗性主效QTL连锁的分子标记方法，其特征是，用黄瓜叶片分离的DNA，采用引物GACTGCGTACCAATTCTA和GATGAGTCTAGAACGGCT；CgACAATCACgggAgAgTTT和TTgTTgCATCAAACTAACACAATC；CgACAATCACgggAgAgTTT和CATATTAgACCCATATTTgTTgCAT；进行PCR扩增，扩增产在在1.5％琼脂糖凝胶和6％聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离后，分别获得分子标记E23m18d、CMBR40和CMBR97的扩增产物；大小分别为350bp、425bp和510bp。

4、根据权利要求3所述的黄瓜霜霉病抗性主效QTL连锁的分子标记方法，其特征是，所述的琼脂糖凝胶，是指：100ml TAE溶液中含有1.5克琼脂糖。

5、根据权利要求3所述的黄瓜霜霉病抗性主效QTL连锁的分子标记方法，其特征是，所述的聚丙烯酰胺凝胶，是指：100ml聚丙烯酰胺凝胶溶液中含有5.7克丙烯酰胺和0.3克甲叉双丙烯酰胺。

6.一种应用如权利要求1所述的黄瓜霜霉病抗性主效QTL连锁分子标记的方法，其特征在于：

a)将通过S94及其衍生品系为父本或母本与其他黄瓜杂交并繁衍至F₂代以上；

b)分离单个黄瓜植株的基因组DNA，检测每个黄瓜植株是否存在与霜霉病主效QTL相连锁的分子标记；如有2个以上分子标记同时出现，则预测该黄瓜的霜霉病的达到抗性的水平。

7、根据权利要求6所述的应用黄瓜霜霉病抗性主效QTL连锁分子标记的方法的应用方法，其特征是，所述的S94及其衍生品系，是指以S94为亲本，通过常规杂交、或采用组织培养、或采用组织培养、或采用花药培养、或用别的物理或化学方法杂交诱导单倍体，再用秋水仙素加倍获得双单倍体或采用遗传转化方法获得的黄瓜品种或品系。

8、根据权利要求6或7所述的应用黄瓜霜霉病抗性主效QTL连锁分子标记的方法的应用方法，其特征是，所述的S94及其衍生品系，将分子标记E23m18d、CMBR40和CMBR97作为辅助选择标记在S94及其衍生品系为抗源的黄瓜霜霉病育种中，通过其基因型来判断其衍生品种或品系是否具有霜霉病抗性。