[发明专利]用于筛选药物的报告基因细胞模型及其构建方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体的，本发明涉及一种独特的基因构建物，含有所述构建物的载体，含有所述载体的细胞，所述细胞可作为模型用于蛋白激酶C信号通路调节药物的筛选。

背景技术

随着现代生物技术的快速发展，基于细胞的药物筛选模型被广泛应用于新药开发，特别是在对大量化合物的高通量筛选中。

蛋白激酶C(PKC)是一类Ca2+、磷脂依赖性的蛋白激酶，在跨膜信号传递过程中起重要作用，介导多种膜受体，如G蛋白偶联受体，酪氨酸激酶受体等的跨膜信号转导。受体激活后导致下游信号分子的活化，如G蛋白、PLC等，这些信号分子再进一步活化PKC，进而引起基因的转录。TPA反应元件(TRE)是与PKC信号偶联的反应元件，当PKC激活后会导致转录因子AP-1与TRE的结合，从而激活TRE下游的基因转录[参见Net Das Evcimen，George L.King，The role ofprotein kinase C activation and the vascular complications of diabetes，Pharmacological Research 55(2007)498-510]。

PKC与多种疾病相关，如肿瘤侵袭、糖尿病综合症、脉管类疾病等，目前正作为一个热门的药物靶点进行新药开发。已上市的PKC抑制剂有礼来公司的ruboxistaurin[参见Birch KA，Heath WF，Hermeling RN，Johnston CM，StrammL，Dell C，Smith C，Williamson JR，Reifel-Miller A，LY290181，aninhibitor of diabetes-induced vascular dysfunction，blocks proteinkinase C-stimulated transcriptional activation through inhibition oftranscription factor binding to a phorbol response element，Diabetes.1996 May；45(5)：642-50]，用于治疗糖尿病视网膜综合症，另外还有多个PKC抑制剂正在进行临床研究，包括治疗糖尿病微血管并发症的PKC-β抑制剂，治疗乳腺癌的PKC-α反义药物Affinitak，治疗多形性成胶质细胞瘤的enzastaurin等[参见Eric Churchill，Grant Budas，Alice Vallentin，Tomoyoshi Koyanagi，and Daria Mochly-Rosen，PKC Isozymes in ChronicCardiac Disease：Possible Therapeutic Targets？Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.2008.48：20.1-20.31]。

PKC信号通路还与多种细胞膜受体的功能相关，可以通过检测PKC的激活间接监测受体的活性，从而用于受体的药物筛选。G蛋白偶联受体是人体内最主要的一类与疾病相关的细胞膜受体超家族，其内源配体囊括了激素，神经递质，细胞因子，钙离子，以及感官刺激等[参见Neubig RR，Siderovski DP，Regulators of G-protein signalling as new central nervous system drugtargets，Nat Rev Drug Discov.2002 Mar；1(3)：187-97]。市场上有近2/3的药物都通过作用于GPCR起效，在药物开发中具有巨大价值。

综上，本领域还有必要进一步开发调节PKC信号通路的物质，建立筛选PKC信号通路调节物质的模型或方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可用于筛选调节蛋白激酶C(PKC)信号通路的物质的细胞模型及其用途。

本发明的目的还在于提供基于所述细胞模型来筛选调节PKC信号通路的物质的方法。

在本发明的第一方面，提供一种构建物，所述构建物从5’端到3’端依次含有式I所示的结构：

                  A-B-C               (式I)

其中，A具有SEQ ID NO：5中第2-82位所示的序列(较佳的，A由SEQ ID NO：5中第2-82位所示的序列构成)；

      B为巨细胞病毒(CMV)启动子序列；

      C为报告基因序列。