[发明专利]泌尿生殖道支原体培养基及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及泌尿生殖道微生物培养及检测方法，具体涉及泌尿生殖道解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)的培养基和检测方法。

背景技术

支原体是目前所知能独立生长，自行繁殖的最小微生物。它无细胞壁，分布广泛，能在人工培养基上生长，但是营养条件要求高。它们与泌尿生殖道炎症密切相关，还能引起免疫性疾病[支原体学，2008年第2版，41-44]。发病率高和致病性强的是解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)。它们与女性生殖道感染，如宫颈炎、子宫内膜炎、盆腔炎以及一些并发症如自然流产、胎膜早破、早产等有关。Uu还可吸付精子上，阻碍其运动，干扰精子与卵子结合，引起不孕；还是引起新生儿呼吸系统和中枢神经系统感染的病原体之一。2000年后，中国在其他传染性疾病报告病例趋于稳定或下降背景下，NGU(非淋菌性尿道炎)报告病例依然呈快速上升趋势，2004年2005年全国由Uu和Mh等微生物感染所引起的NGU占到七种性病之首，构成分别达35.94％和36.78％。2005年上海地区NGU发病率达到56.87/10万[全国性病疫情分析报告，2006.20(2)：1-9]。发病形势严峻。

检测Uu和Mh的方法有免疫学检测、核酸测定、分离培养等。支原体属内不同种的支原体存在着交叉免疫反应，有些支原体还存在着异质性抗原，因此免疫性检测方法目前应用受到限制[中华检验医学杂志，2005，28(7)：677-678]。鉴于PCR检测中存在的严重假阳性问题，中国卫生部颁布了规范性文件[卫医发(2002)10]，对临床应用此项技术开展实验诊断的单位和部门，设定严格的准入条件。况且目前为止国内市场上还没有一个合法的临床诊断试剂盒供应，因此短期内普遍开展还有难度。分离培养一直是微生物检测的“金标准”，也是支原体检测最常用的方法。

纵览国内有关泌尿生殖道支原体培养的文献发现，支原体的鉴定主要依据液体培养，它依据Uu利用尿素和Mh以精氨酸为能源，分解产氨和二氧化碳，使pH值升高，含酚红指示剂的培养液由黄色变红色提示支原体生长。虽然液体培养基使用方便、快速、判断容易，事实上泌尿生殖道中某些微生物含有脲酶，能生物利用液体培养基中某些成份，使pH升高而改变颜色，出现严重的的假阳性[临床检验杂志2004，22(5)：321-322]。广谱抗生素的广泛使用，微生物的耐药性出现了很大的变迁，泌尿生殖道寄居的微生物呈现多样化[中国微生态学杂志2003，15(1)：43]。杂菌的存在，一定程度上竞争Uu生长所需的营养，呈优势生长而干扰支原体最终的结果判断。另外，产尿素酶杂菌的生长导致酸碱变化，也可造成Uu液体培养结果的错误判断[河北医学2004，10(7)：614-616]。

固体培养通过显微镜观察有无油煎蛋状菌落生长、形态特征等性状鉴别多种支原体，但是国产固体培养基在质量上与进口的A7固体培养基相比有较大差距。进口固体培养基价格昂贵，定购周期长，培养基变得干薄可能影响检测效果。另外，直接将样品接种到固体培养基中，其检测阳性率较低。临床实践发现，大量商品化独立使用的支原体液体、或者固体培养基产品，在敏感性和特异性方面存在较大差异，即使同一品牌的液体培养的阳性率显著高于固体培养，目前尚无优质的组合使用的支原体培养基及制备方法。

发明内容

本发明是提供检测泌尿生殖道Uu和Mh的培养基及检测方法，根据2种支原体生物学特性，优化了维持支原体生长的营养、抑制杂菌生长抗生素的组合。突出了液体培养基可以提高阳性率、固体培养基避免了其他微生物因为改变颜色造成的假阳性，并且显著提高了固体培养的阳性率。当组合使用，提高了泌尿生殖道Uu和Mh支原体检测的敏感性和特异性。

本发明提供的泌尿生殖道支原体培养基和检测方法，其特征是含有胰酶大豆肉汤、酵母浸液、尿素、精氨酸、L-半胱氨酸、酚红、HEPES液、小牛血清、硫酸锰、万古霉素、两性霉素B、甲氧苄氨嘧啶、多粘菌素、青霉素等要素的配方，并且液体培养基和固体培养基在培养、分离、鉴别泌尿道支原体时组合使用。液体培养基用于接种临床样品、抑制杂菌、具有同时促进Uu和Mh支原体生长、指示是否有支原体生长；固体培养基用于观察培养物是否支原体、鉴别解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)。