[发明专利]替曲卡星A的生物合成基因簇及其应用

权利要求书

1.一种基因中断的突变菌株，其特征在于，所述的突变菌株是青褐色小单 孢菌NRRL11289的突变株，并且突变菌株中的tacA1、tacA2、tacA4和tacA5基 因被中断，

其中tcaA1位于基因簇核苷酸序列第25588-44580个碱基处，长度为18993 个碱基对，编码聚酮合成酶，6330个氨基酸；

tcaA2位于基因簇核苷酸序列第44582-65605个碱基处，长度为21024个碱基 对，编码聚酮合成酶，7007个氨基酸；

tcaA4位于基因簇核苷酸序列第65565-71087个碱基处，长度为5523个碱基 对，编码聚酮合成酶，1840个氨基酸；

tcaA5位于基因簇核苷酸序列第71162-75775个碱基处，长度为4614个碱基 对，编码聚酮合成酶，1537个氨基酸；

并且，所述基因簇的核苷酸序列如SEQID NO.：1所示；

并且，所述的突变菌株不再产生替曲卡星A，并且是如下制备的：

首先对粘粒pTL3001和pTL3002进行NotI/BamHI限制性内切酶酶切分别获 得6.0kb和4.5kb的基因片段，连接入质粒载体pANT841的相应酶切位点，得到 重组质粒pTL3016和pTL3017；

再分别从中酶切回收6.0kb HindIII/BamHI和4.5kb BamHI/SpeI片段，将其共 同连入pOJ260载体的HindIII/XbaI位点，构建tcaA1，tcaA2，tcaA4和tcaA5基因 中断突变株的重组质粒；

将该质粒导入替曲卡星A的产生菌青褐色小单孢菌NRRL11289中，获得基 因中断的双交换突变菌株。

2.如权利要求1所述的基因中断的突变菌株的用途，其特征在于，所述突变 菌株用于经生物发酵得到替曲卡星A的结构类似物。