[发明专利]生物催化法制备4－氰基－3－羟基丁酸乙酯的两种高光学活性对映体

权利要求书

1.一种生物催化法制备4-氰基-3-羟基丁酸乙酯的两种高光学活性对映体的方法，其特征在于，所采用的微生物菌株为Klebsiella pneumoniaePhe-E4或Bacillus pumilus Phe-C3；用Klebsiella pneumoniae Phe-E4菌株进行生物催化所得到的产物为(S)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯，用Bacillus pumilus Phe-C3进行生物催化所得的产物为(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯。

2.如权利要求1所述的制备4-氰基-3-羟基丁酸乙酯的两种高光学活性对映体的方法，包括以下步骤：

(1)将权利要求1中所述的菌株Klebsiella pneumoniae Phe-E4或Bacillus pumilus Phe-C3进行平板培养、摇瓶培养、发酵罐培养，得到的菌液离心获得湿菌体；

(2)将(1)所得的湿菌体分散到磷酸盐缓冲液中去；

(3)将4-氰基乙酰乙酸乙酯加入(2)所述的体系中去反应，然后从反应体系中收集还原产物。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中的划板培养所用的培养基为LB琼脂培养基，其组成为：蛋白胨1％，酵母浸膏0.5％，氯化钠1.0％，琼脂1.5％，余量为蒸馏水；pH 7.0。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中摇瓶培养所用的培养基为M9培养基，其组成为：Na₂HPO₄6.78‰，KH₂PO₄3.0‰，NaCl 0.5‰，NH₄Cl 1.0‰，MgSO₄0.24‰，CaCl₂0.01‰，余量为蒸馏水；pH为7.4。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述的4-氰基乙酰乙酸乙酯是以4-氯乙酰乙酸乙酯为原料进行合成。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所用到的细胞浓度为3-24g cdw/L。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(4)中反应温度为28℃，反应时间为0.5-70小时，所用的缓冲液pH为7.0，底物浓度为5-30mM。