[发明专利]新型标签蛋白及其应用

权利要求书

1.一种表达目的蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括：

(a)提供一种表达载体，从5’至3’依次含有以下可操作性相连的元件：亮氨酸拉链1的编码基因，类泛素分子羧基端区域的编码基因，和目的蛋白的编码基因；

(b)将(a)的表达载体转入宿主细胞，从而表达亮氨酸拉链1，类泛素分子羧基端区域和目的蛋白的融合蛋白，分离所述的融合蛋白；

(c)提供一种类泛素分子重建蛋白，其含有类泛素分子氨基端区域和亮氨酸拉链2，所述亮氨酸拉链2与亮氨酸拉链1可相互作用形成亮氨酸拉链二聚体；

(d)混合(c)的类泛素分子重建蛋白与(b)的融合蛋白，从而生成重建产物，所述的重建产物包含：由亮氨酸拉链1和亮氨酸拉链2相互作用形成的亮氨酸拉链二聚体，重建的类泛素分子，和目的蛋白；和

(e)用类泛素分子的特异性蛋白酶处理(d)的重建产物，从而将亮氨酸拉链二聚体和重建的类泛素分子切割下来，分离获得所述的目的蛋白

其中，所述的类泛素分子是SUMO。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的类泛素分子的羧基端区域的氨基酸序列如SEQ ID NO：3中第52-96位所示；或者

所述的类泛素分子的氨基端区域的氨基酸序列如SEQ ID NO：4中第9-62位所示；或者

所述的亮氨酸拉链1的氨基酸序列如SEQ ID NO：3中第14-43位所示；或者

所述的亮氨酸拉链2的氨基酸序列如SEQ ID NO：4中第69-97位所示。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(a)中，在所述的亮氨酸拉链1的编码基因和类泛素分子羧基端区域的编码基因之间，还包括一连接序列，所述的连接序列编码SEQ ID NO：3中第44-51位的氨基酸序列；或者

(c)中，在所述的类泛素分子氨基端区域和亮氨酸拉链2之间，还包括一连接序列，所述的连接序列如SEQ ID NO：4中第63-68位所示。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(a)中，所述的表达载体含有：

SEQ ID NO：5中31-288所示的核苷酸序列；或

SEQ ID NO：5中5-288所示的核苷酸序列；或

SEQ ID NO：5中1-288所示的核苷酸序列。

5.如权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，(a)中，所述的表达载体还含有至少一个纯化用标签的编码基因；或者

(c)中，所述的类泛素分子重建蛋白还包含至少一个纯化用标签。

6.一种用于目的蛋白表达的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒含有：

(1)一种用于表达目的蛋白的表达载体，从5’至3’依次含有以下可操作性相连的元件：亮氨酸拉链1的编码基因，类泛素分子羧基端区域的编码基因；和

(2)一种类泛素分子重建蛋白，其从氨基端至羧基端依次含有类泛素分子氨基端区域和亮氨酸拉链2；或一种类泛素分子重建表达载体，其含有可操作性相连的元件，所述元件编码所述的类泛素分子重建蛋白；

其中，所述的亮氨酸拉链1和亮氨酸拉链2可相互作用形成亮氨酸拉链二聚体；

其中，所述的类泛素分子是SUMO。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，(1)中，在所述的类泛素分子羧基端区域的编码基因的3’端后，含有多克隆位点，该位点用于插入目的蛋白。

8.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，其中还含有：

用于目的蛋白表达的宿主细胞；和/或

类泛素分子的特异性蛋白酶。